Cytokemi historia, föremål för studie, användbarhet och tekniker
![Cytokemi historia, föremål för studie, användbarhet och tekniker](https://learnaboutworld.com/storage/img/images/citoqumica-historia-objeto-de-estudio-utilidad-y-tcnicas.jpg)
- 2342
- 44
- Anders Larsson
De Cytokemi Den innehåller en serie tekniker som är baserade på identifiering och disposition av vissa specifika ämnen inuti cellen. Det betraktas som en gren av cellbiologi som kombinerar cellmorfologi med den kemiska strukturen.
Enligt Bensley, grundare av tillämpningen av modern cytologi, uttrycker den att syftet med cytokemi är att upptäcka den kemiska organisationen av celler för att förstå livets mysterier. Samt studera de dynamiska förändringarna som inträffar under de olika funktionella stegen.
![](https://learnaboutworld.com/storage/img/images/citoqumica-historia-objeto-de-estudio-utilidad-y-tcnicas.jpg)
På detta sätt är det möjligt att bestämma den metaboliska roll som dessa ämnen möts i cellen.
Cytokemi använder två huvudmetoder. Den första är baserad på kemiska och fysiska procedurer. Dessa tekniker använder sig av mikroskopet som ett oumbärligt instrument för att visualisera de kemiska reaktionerna som inträffade på specifika ämnen i cellen.
Exempel: Användningen av cytokimiska färgämnen, såsom reaktionen av Ferexgen eller PAS -reaktion, bland andra.
Den andra metoden är baserad på biokemi och mikrokemi. Med denna metod är det möjligt att kvantitativt bestämma närvaron av intracellulära kemikalier.
Bland de ämnen som kan bevisas i en cellvävnad eller struktur är följande: proteiner, nukleinsyror, polysackarider och lipider.
[TOC]
Cytokemi
Cytokemiska tekniker sedan deras uppfinning har bidragit till att förstå sammansättningen av celler, och med tiden har en mängd olika tekniker som använder olika typer av färgämnen med affiniteter och olika grunder dykt upp.
Därefter öppnade cytokemi nya horisonter med användning av vissa substrat för att färga närvaron av enzymer eller andra molekyler inuti cellen.
På samma sätt har andra tekniker såsom immunocytocys som har varit till stor hjälp för diagnosen av många sjukdomar. Immunocytokemi är baserad på antigen-antikroppsreaktioner.
Å andra sidan har cytokemi också använt fluorescerande ämnen som kallas fluorokromer, som är utmärkta markörer för detektering av vissa cellulära strukturer. På grund av fluorokromens egenskaper belyser den strukturerna som den har ställts in.
Vad studerar du?
De olika cytokemiska teknikerna som används på ett biologiskt prov har något gemensamt: att lyfta fram närvaron av en specifik typ av substans och veta dess placering inom den biologiska strukturen under utvärdering, oavsett om det är en celltyp eller en vävnad.
Dessa ämnen kan vara enzymer, tungmetaller, lipider, glykogen och definierade kemiska grupper (aldehyder, tyrosin, etc.).
Informationen från dessa tekniker kan inte bara vägleda för cellidentifiering, utan också för diagnos av olika patologier.
Till exempel är cytokemisk färgning mycket användbara för att skilja mellan de olika typerna av leukemi, eftersom vissa celler uttrycker vissa viktiga enzymer eller ämnen och andra inte.
Å andra sidan bör det noteras att för att användningen av cytokemi ska vara möjlig måste följande överväganden vidtas:
Kan tjäna dig: gram fläck1) Ämnet måste immobiliseras på den plats där det är naturligt.
2) Ämnet måste identifieras med hjälp av underlag som reagerar specifikt med det och inte med andra föreningar.
Verktyg
Proverna som kan studeras genom cytokemiska tekniker är:
- Utökat perifert blod.
- Benmärg förlängt.
- Tyger som är inställda på histokemi -tekniker.
- Cytocentrifugeringsceller.
Cytokemiska tekniker är av stort stöd inom hematologin, eftersom de används allmänt för att hjälpa till vid diagnos och differentiering av vissa typer av leukemi.
Till exempel: Mattningsreaktioner tjänar till att skilja mellan en myelomonocytisk leukemi från akut monocytisk leukemi.
Benmärgsutstryk och perifert blod hos dessa patienter är liknande, eftersom vissa celler endast är svåra att identifiera sig ur den morfologiska synvinkeln. För detta utförs fastighetstestet.
I det första ger de positiva de specifika mattorna, medan de ospecifika frågorna i den andra ger positiva.
De är också mycket användbara i histologi, eftersom till exempel användningen av tungmetallfärgningsteknik (argisk impregnering), fläckar intensiva bruna retikulära fibrer i myokardvävnad.
Tekniker inom cytokemi
De mest använda teknikerna kommer att förklaras nedan:
- Färgämnen
Färgämnena är mycket olika i cytokemiska tekniker och dessa kan klassificeras enligt flera vyer:
Enligt den radikal som de har affinitet
De är indelade i: syror, grundläggande eller neutrala. De är de enklaste och de mest använda genom historien, vilket gör att de utmärker de basofila komponenterna i acidofiler. Exempel: Hematoxylin-eosinfärgning.
I det här fallet färgas cellernas centra (de tar hematoxylin som är det grundläggande färgämnet) och de röda cytoplasmerna (de tar eosin som är syrafärgningen).
Enligt färgen de ger
De kan vara ortokromatiska eller metakromatiska. Ortokromatisk är de som fläckar strukturerna i samma färg som färgämnet har. Till exempel fallet med Eosina, vars färg är röd och färgämnen röd.
Metakromatisk fläckar istället strukturerna i en annan färg än deras färg, såsom toluidin, vars färg är blå och ändå färgämne violet.
Vital eller supravital färg
De är ofarliga färgningar, det vill säga de färgar cellerna och de håller sig vid liv. Dessa färgämnen kallas vitala (t.ex. The Blue of Tripán to Dye Macrophages) eller Supravital (t.ex. Janus's Green to Dye Mitochondria eller den neutrala röda som färgämnen lysosomer).
- Lipiddetektering genom fett -lösliga färgämnen
Osmiumtetroxid
Färgning av lipider (icke -mättade fettsyror) svarta. Denna reaktion kan observeras med det optiska mikroskopet, men eftersom dessa färgämnen har hög densitet kan också visas med elektroniskt mikroskop.
Sudan III
Är en av de mest använda. Detta färgämne sprids och solubiliseras i vävnaderna och ackumuleras inuti lipiddropparna. Färgen är skarlakansröd.
Svart sudan färgning b
Det ger bättre kontrast än de tidigare eftersom det också kan lösa upp i fosfolipider och kolesterol. Det är användbart för att upptäcka azurofila och specifika granuler av mogna granulocyter och deras föregångare. Identifierar därför myeloida leukemier.
Det kan tjäna dig: metylröd: egenskaper, förberedelser och applikationer- Tinion av aldehyder (Schiffs Perchyic Acid -färgning)
Schiffs periódic acid -färgning kan upptäcka tre typer av bygrupper. Dom är:
- Fria aldehyder, naturligtvis närvarande i vävnaderna (plasmal reaktion).
- Aldehyder producerade genom selektiv oxidation (PAS -reaktion).
- Aldehydos genererade genom selektiv hydrolys (Faulgen -reaktion).
PAS -reaktion
Denna färgning är baserad på att upptäcka vissa typer av kolhydrater, såsom glykogen. Schiffs perioódinsyran bryter C-C-bindningarna av kolhydrater på grund av oxidation av 1-2 glykolgrupper och släpper aldehydgrupper.
De fria aldehydesgrupperna reagerar med Schiff -reagenset och bildar en lila röd förening. Utseendet på lila röd färg visar en positiv reaktion.
Detta test ger positivt i växtceller, detektering av stärkelse, cellulosa, hemicellulosa och peptiner. Medan i djurceller upptäcker det muciner, mukoproteiner, hyaluronsyra och kitin.
Dessutom är det användbart vid diagnosen lymfoblastiska leukemier eller erytroleucemi, bland andra patologier av myelodisplastisk typ.
När det gäller sura kolhydrater kan buntet med blå Alcián användas. Testet är positivt om en ljusblå/turkosa färg observeras.
Plasmal reaktion
Den plasmala reaktionen belyser närvaron av vissa alifatiska aldehyder med lång kedja såsom palmital och stearal. Denna teknik gäller för frysta histologiska snitt. Det är direkt med Schiff -reagenset.
Feregreaktion
Denna teknik upptäcker närvaron av DNA. Tekniken består av att utsätta vävnaden fixerad till svag syrahydrolys för att senare reagera med Schiff -reagens.
Hydrolysblad exponerade aldehyderna för deoxyribos på nivån av deoxyribos-purinföreningen. Sedan reagerar Schiff -reagensen med aldehyderna som var fria.
Denna reaktion är positiv i kärnorna och negativa i cellernas cytoplasmer. Positivitet bevisas av närvaron av en röd färg.
Om denna teknik kombineras med grön-pyroningrön är det möjligt att samtidigt upptäcka DNA och RNA.
- Cytokimisk färgning för proteinstrukturer
För att göra detta kan Millon -reaktionen användas, vilket kvicksilvernitrat används som ett reagens. Strukturer som innehåller aromatiska aminosyror kommer att färgas.
- Cytokemisk färgning som använder substrat för att demonstrera närvaron av enzymer
Dessa färgningar är baserade på inkubationen av det biologiska provet med ett givet underlag och reaktionsprodukten reagerar senare med diazoiska salter för att bilda ett färgat komplex.
Esteras
Dessa enzymer finns i lysosomerna i vissa blodceller och kan hydrolysera organiska estrar som släpper NAFTOL. Den här sista bildar ett olösligt socker när den förenar sig i ett dialysalt, färgning av platsen där reaktionen inträffar.
Det finns flera underlag och beroende på vilken man kan användas. De första är närvarande i de omogna cellerna i myeloidserien och den andra i cellerna med monocytiskt ursprung.
Kan tjäna dig: grundläggande tyg: vad är, egenskaper och funktionerSubstratet som används för bestämning av specifika mattor är: NAFTOL-AS-D-kloroacetat. Medan för bestämning av ospecifika mattor, flera substrat såsom acetat NAFTOL, naphyl -APH -konfetacetatet och butyrat -naphylalfa.
I båda fallen kommer cellerna att färgas röda i intensivt rött när reaktionen är positiv.
Myeloperoxidas
Detta enzym finns i de azurofila granulerna i granulocytiska och monocytceller.
Dess detektion används för att differentiera leukemi av myeloid ursprung med avseende på lymfoider. Celler som innehåller myeloperoxidaser colo från ockersgul.
Fosfataser
Dessa enzymer frigör fosforsyror från olika substrat. De skiljer sig från varandra beroende på substratets specificitet, pH och handling av hämmare och inaktivatorer.
Bland de mest kända är fosfomonosterer som hydrolyserar enkla estrar (P-O). Exempel: Alkaliskt fosfatas och surt fosfatas, såväl som fosfamidaser som hydrolyserar fackföreningarna (P-N). Dessa används för att differentiera lymfoproliferativa syndrom och för diagnos av trikoleucemi.
- Trikromiska färg
Mallary-azan trikromisk
De är användbara för att skilja cytoplasma från cellfibercellerna. Cellerna är färgade röda och kollagenfibrerna av blått.
Massons trikromiska
Detta har samma användbarhet som det föregående, men i detta fall färgas cellerna röda och kollagenfibrerna hos grönt.
- Färgämne som fläckspecifika organeller
Janus Green
Denna selektivt fläckar mitokondrier.
Silver- och osminsyrasalter
Fläck till Golgi -apparaten.
Toluidinblå
Nissis kroppar fläckar
Silver- och PAS -salter
Retikulära fibrer och basplåtfärg.
Orcein och Fuchsin Resorcin
Fläckar de elastiska fibrerna. Med den första är de färgade bruna och med den andra blå eller intensiva lila.
- Andra tekniker som används i cytokemi
Användning av fluorescerande eller fluorokromämnen
Det finns tekniker som använder fluorescerande ämnen för att studera platsen för en struktur i en cell. Dessa reaktioner visualiseras med speciellt mikroskop som kallas fluorescens. Exempel: IFI -teknik (indirekt immunofluorescens).
Detektion av cellulära komponenter genom immunocytokemi
Dessa tekniker är mycket användbara inom medicin eftersom de hjälper till att upptäcka en viss cellulär struktur och också kvantifierar den. Denna reaktion är baserad på en antigen-antikroppreaktion. Till exempel: ELISA: s tekniker (enzymimmuno -uppsats).
rekommendationer
- Det är nödvändigt att använda smetkontroller för att utvärdera färgämnets korrekt funktion.
- Färsk smet bör användas för att utsättas för cytokemiska färger. Om inte möjligt måste de skyddas från ljus och bevaras vid 4 ° C.
- Det bör tas om att den använda fixeren inte påverkar ämnet negativt för att undersöka. Det vill säga, det bör undvikas att det kan extrahera eller hämma det.
- Tiden för användningen av fixeringsmedlen måste respekteras, eftersom den vanligtvis bara bör de sista sekunderna, eftersom att utsätta smet mer tid för fixativet kan skada vissa enzymer.
Referenser
- ”Cytokymik." Wikipedia, fri encyklopedi. 30 juni 2018, 17:34 UTC. 9 jul 2019, 02:53 Finns på: Wikipedia.org
- Villarroel P, från Suárez C. Metallimpregneringsmetoder för studie av myokardiella retikulära fibrer: Jämförande studie. Rfm 2002; 25 (2): 224-230. Finns på: Scielo.org
- Santana A, Lemes A, Bolaños B, Parra A, Martín M, Molero T. Cytokemi för syrafosfatas: Metodologiska överväganden. Rev Diagn Biol. 200; 50 (2): 89-92. Finns på: Scielo.org
- Av Robertis E, av Robertis M. (1986). Cellulär och molekylärbiologi. 11 Goes Edition. Ateneo redaktion. Buenos Aires, Argentina.
- Klassiska verktyg för studier i cellbiologi. TP 1 (kompletterande material) - Cellbiologi. Finns på: dbbe.fcen.Uba.ar
- « Maristrevolution orsaker, scener, konsekvenser och karaktärer
- Stilla havets geologiska ursprung, egenskaper, väder, flora och fauna »