Hög effekt vätskekromatografi (HPLC) Foundation, utrustning, typer

De Flytande kromatografi med hög effektivitet Det är en instrumentell teknik som används i kemisk analys som den får separera blandningar, rena och kvantifiera dess komponenter, samt utföra andra studier. Det är känt med HPLC -förkortningen, härrörande från engelska: Högpresterande flytande kromatografi.

Således, som namnet påpekar, fungerar det genom att manipulera vätskor. Dessa består av en blandning som består av analyten eller provet av intresse, och en eller flera lösningsmedel som fungerar som den mobila fasen; Det vill säga den som drar analyt i hela HPLC -teamet och kolumnen.

HPLC -utrustning. Källa: DQWYY [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenser/BY-SA/4.0)]

HPLC sprids allmänt av kvalitetsanalyslaboratorier i många företag; som farmaceuter och mat. Analytikern i fråga måste förbereda provet, mobilfasen, kontrollera temperaturen och andra parametrar och placera vägarna inuti hjulet eller karusellen så att utrustningen utför injektionerna automatiskt.

HPLC -utrustning är kopplad till en dator genom vilken de genererade kromatogrammen kan observeras, samt starta analysen, kontrollera flödet i mobilfasen, programmera typen av eluering (isokratisk eller genom lutning) och slå på detektorerna (UV -Vis eller masspektrofotometern).

[TOC]

Grund

Till skillnad från konventionell vätskekromatografi, såsom papper eller kolonn fylld med gelkiseldioxid, beror HPLC inte på tyngdkraften så att vätskan väter den stationära fasen. Arbeta istället med högpresspumpar, som bevattnar mobil- eller elueringsfasen genom kolumnen med större intensitet.

På detta sätt är det inte nödvändigt.

Kan tjäna dig: karbonoider: element, egenskaper och användningar

Men effektiviteten i denna teknik beror inte uteslutande på denna detalj, utan också på de små fyllande partiklarna som utgör den stationära fasen. Att vara mindre är dess kontaktområde med den mobila fasen större, så den kommer att interagera i bättre grad med analyt och dess molekyler kommer att separeras mer.

Dessa två egenskaper, plus det faktum att tekniken tillåter detektorkoppling, gör HPLC mycket högre än fina eller pappersskiktskromatografi. Separationerna är mer effektiva, mobilfasen rör sig bättre genom den stationära fasen och kromatogram gör det möjligt att upptäcka viss analys i analysen.

Utrustning

Förenklat diagram över driften av en HPLC -utrustning. Källa: Gabriel Bolívar.

Ett förenklat diagram visas ovan hur ett HPLC -team fungerar. Lösningsmedlen finns i sina respektive behållare, arrangerade med slangar för att pumpen ska bära en liten volym av dem i utrustningen; Vi har den mobila fasen.

Den mobila eller eluerande fasen måste slitas först, så att bubblorna inte påverkar separationen av analytmolekylerna, som blandas med den mobila fasen när utrustningen har gjort injektionerna.

Den kromatografiska kolonnen är belägen i en ugn som tillåter att reglera temperaturen. För olika prover finns således tillräckliga temperaturer för att uppnå högpresterande separationer, liksom en bred katalog över kolumner och typ av fyllningar eller stationära faser för specifik analys i specifik analys.

Den mobila fasen med den upplösta analyten kommer in i kolonnen, och från den först eluerar molekylerna som "känner" mindre affinitet för den stationära fasen, medan de sedan framkallar de som behålls mest av den. Varje eluida -molekyl genererar en signal som visualiseras i kromatogrammet, där retentionstiderna för de separata molekylerna observeras.

Kan tjäna dig: Liquefaction: Concept, Gases, Soils and Seismic, Seminal

Och å andra sidan slutar den mobila fasen efter att ha passerat detektorn i en avfallsbehållare.

HPLC -typer

Det finns många typer av HPLC, men bland dem alla är de mest framstående är följande fyra.

Normalfaskromatografi

Normal faskromatografi hänvisar till det där den stationära fasen är polär natur, medan den apolära mobilen. Även om det kallas normalt, är det faktiskt den minst använda, att vara den omvända fasen den mest utbredda och effektiva.

Omvänd faskromatografi

Som en omvänd fas är den stationära fasen nu apolär och den polära mobilfasen. Detta är särskilt användbart vid biokemisk analys, eftersom många biomolekyler upplöses bättre i vatten- och polära lösningsmedel.

Jonutbyteskromatografi

I denna typ av kromatografi rör sig analyt, med positiv eller negativ belastning, genom kolonnen och ersätter jonerna som den husar. Ju större last, desto större är dess retention, så den används allmänt för att separera jonövergångsmetaller.

Molekylär uteslutningskromatografi

Denna kromatografi, snarare än att separera, är ansvarig för att rena den resulterande blandningen. Som namnet antyder separeras analyt inte längre beroende på hur relaterad till den stationära fasen, men enligt dess molekylstorlek och massor.

De minsta molekylerna kommer att behållas mer än stora molekyler, eftersom de senare inte fångas mellan porerna i kolonnens polymerfyllningar.

Ansökningar

HPLC tillåter både kvalitativ och kvantitativ analys. När det gäller det kvalitativa, vid jämförelse av retentionstiderna för kromatogrammet under vissa förhållanden, kan närvaron av en viss förening detekteras. Denna närvaro kan indikera en sjukdom, förfalskning eller droganvändning.

Kan tjäna dig: Löst och lösningsmedel

Därför är det ett team är en del av de diagnostiska laboratorierna. På samma sätt är det inom läkemedelsindustrin, eftersom det gör det möjligt att verifiera produktens renhet, liksom kvaliteten på samma sak som avseende upplösning i magmiljön. Startmaterialet underkastas också HPLC för att rena dem och garantera en bättre prestanda i läkemedelssyntesen.

HPLC låter dig analysera och separera komplexa proteinblandningar, aminosyror, kolhydrater, lipider, porfyriner, terpenoider och i huvudsak är det ett utmärkt alternativ att arbeta med växtextrakt.

Och slutligen tillåter molekylär uteslutningskromatografi dig att välja polymerer i olika storlekar, eftersom vissa kan vara mindre eller stora. På detta sätt erhålls produkter med låga eller höga genomsnittliga molekylmassor, detta är en avgörande faktor i dess egenskaper och framtida tillämpningar eller syntes.

Referenser

1. Dag, r., & Underwood, a. (1989). Kvantitativ analytisk kemi. (Femte ed.). Pearson Prentice Hall.
2. Bussi Juan. (2007). Vätskekromatografi med hög effekt. [Pdf]. Återhämtad från: finger.Edu.åh
3. Wikipedia. (2019). Högpresterande vätskekromatografi. Hämtad från: i.Wikipedia.org
4. Clark Jim. (2007). Högpresterande flytande kromatografi. Återhämtat sig från: Chemguide.co.Storbritannien
5. Matthew Barkovich. (5 december 2019). Högpresterande flytande kromatografi. Kemi librettexts. Återhämtad från: kem.Librettexts.org
6. G.P. Thomas. (15 april 2013). High Performance Liquid Chromatography (HPLC) - Metoder, fördelar och applikationer. Återhämtat sig från: azom.com