Ziehl-Neelsen-färgning

Mycobacterium tuberculosis visualiserad med färgning av ziehl-neelsen

Vad är Ziehl-Neelsens färgning?

De Ziehl-Neelsen-färgning I en färgteknik för att identifiera resistenta alkoholsyra-mikroorganismer (AAR). Namnet på detta mikrobiologiska förfarande hänvisar till sina författare: Bakteriologen Franz Ziehl och patologen Friedrich Neelsen.

Denna teknik är en differentiell färgtyp, vilket innebär användning av olika färgämnen för att skapa kontrast mellan de strukturer som önskas att observera, differentiera och därefter identifiera. Ziehl-Neelsens färgning tjänar till att identifiera vissa typer av mikroorganismer.

Några av dessa mikroorganismer är mykobakterier (till exempel, Mycobacterium tuberculosis), Nocardias (till exempel, Nokardi sp.) och några encelliga parasiter (till exempel, Cryptosporidium parvum). Många av bakterierna kan klassificeras genom en gemensam teknik som kallas Gram -färgning.

Vissa bakteriegrupper kräver dock andra metoder för att identifiera dem. Tekniker som Ziehl-Neelsen-färgning kräver värmekombinationer med värme för att fixa den första till cellväggen.

Sedan kommer en missfärgningsprocess som gör det möjligt att få två resultat: resistens eller känslighet mot sura och alkoholer missfärgning.

Grund

Grunden för denna färgningsteknik är baserad på egenskaperna hos cellväggen i dessa mikroorganismer. Väggen bildas av en typ av fettsyror som kallas mykolsyror; Dessa kännetecknas av att presentera mycket långa kedjor.

När fettsyror har mycket långa strukturer kan dessa behålla färgämnen lättare. Vissa bakteriergenrer är mycket svåra att färga genom gramfärgning på grund av det höga innehållet i mykolsyror från cellväggen.

I Ziehl-Neelsen-färgning används fenolföreningen Fuchsin Carbol, ett grundläggande färgämne. Detta har förmågan att interagera med fettsyrorna i cellväggen, som är av CEROSA -struktur vid rumstemperatur.

Kan tjäna dig: monosackarider

Färgan med fuchsin -karbol förbättras i närvaro av värme, eftersom vaxet smälter och färgmolekylerna rör sig snabbare in i cellväggen.

Den syra som användes senare tjänar till att missfärgas cellerna som inte färgades eftersom deras vägg inte var relaterad till färgämnet; Därför kan den sura syrans kraft eliminera syrafärgämnet. Cellerna som motstår denna missfärgning kallas syrabeständiga.

Folktoner

Efter missfärgningen av provet står detta i kontrast till ett annat färgämne som kallas sekundärfärgämne. Mustileo Blue eller Malachite Green används vanligtvis.

Det sekundära färgämnet fläckar bakgrundsmaterialet och skapar följaktligen kontrast till strukturerna som färgades i det första steget. Endast missfärgade celler absorberar det andra färgämnet (mot tinction) och tar sin färg, medan syraresistenta celler behåller den röda färgen.

Denna procedur används ofta för att identifiera Mycobacterium tuberculosis och Mycobacterium leprae, som kallas resistenta syra-alkoholbaciller.

Reagens

Primärfärg

0,3 % fuchsin Carbol används (filtreras). Detta färgämne framställs av en blandning av alkoholer: etanolfenol (90 %) eller metanol (95 %), och i denna blandning 3 gram grundläggande fuchsin upplös.

Avbrytande lösning

I detta steg kan du använda 3 % alkoholsyralösningar eller 25 % svavelsyra.

Sekundär färgning (motkrage)

Det mest använda färgämnet för att kontrastera i proverna är vanligtvis 0,3 % metylenblått. Men andra kan också användas, till exempel 0,5 % malakitgrön.

Kan tjäna dig: Timina

Metod

Nematode visas med Ziehl-Neelsen

Syraöppning av färgning

Förbered en bakteriell smet

Denna förberedelse görs på en ren och torr bild, efter sterilitetsåtgärder.

Frores torkning

Låt smeten torka vid rumstemperatur.

Värm provet

Provet måste värmas genom att applicera eld på bilden nedan. En fixering med alkohol kan göras när lukten inte har framställts med sputum (behandlas med natriumhypoklorit för att bleka den) och om den inte kommer att färgas omedelbart.

M. tuberkulos elimineras med blekmedel och under färgningsprocessen. Termofixationen av den icke -behandlade sputumet kommer inte att döda M. tuberkulos, Medan alkoholfixering är baktericid.

Täck fläcken

Fläcken är täckt med fuchsin -karbollösningen (primär grundfärg).

Värm fläcken

Detta görs i 5 minuter. Du bör märka en ångavskiljning (cirka 60 ° C). Det är viktigt att inte överhettas och undvika att bränna provet.

I förhållande till uppvärmningen av fläcken bör du vara mycket försiktig när du värmer fuchsin -karbolen, särskilt om färgningen utförs på ett bricka eller annan behållare där mycket brandfarliga kemikalier har samlats från föregående tidigare färgning.

Endast en liten låga ska appliceras under bilderna med hjälp av en swabbelysning som tidigare fuktats med några droppar sur alkohol, metanol eller 70 % etanol. Undvik att använda en stor vattpinne som blötläggs i etanol eftersom detta är en risk för eld.

Tvätta fläcken

Denna tvätt måste göras med rent vatten. Om kranvatten inte är rent, tvätta gnidningen med filtrerat eller destillerat vatten, helst.

Täck utstryket med syra alkohol

Denna sura alkohol måste vara 3 %. Täckningen utförs i 5 minuter eller tills lukten är tillräckligt missfärgad, det vill säga blekrosa.

Kan tjäna dig: epiblast

Det måste beaktas att sur alkohol är brandfarlig; Därför bör den användas mycket noggrant. Undvik att vara nära tändningskällor.

Tvätta fläcken

Tvätt bör vara med rent, destillerat vatten.

Täck utstryket med färgämne

Det kan vara malachitgrön färg (0,5 %) eller metylenblått (0,3 %) under 1 eller 2 minuter, med den högre tiden om lukten är tunn.

Tvätta fläcken

Rent vatten (destillerat) ska användas igen.

Tömma

Baksidan av bilden måste rengöras och fläcken placeras på en dräneringshylla, så att den torkar i luften (använd inte absorberande papper för torkning).

Undersök utstrykningen i mikroskopet

Målet med 100x och nedsänkningsolja bör användas. Skanna smet systematiskt och skriv ner relevanta observationer.

Tolka resultaten

Teoretiskt betraktas mikroorganismer som färgas från en rödaktig färg som positiv alkoholsyra (AAR+).

Tvärtom, om mikroorganismer är färgade blå eller gröna, beroende på färgämnet som används som motkrage, betraktas de som negativ resistent syra (AAR-).

Referenser

1. Apurba, s. & Sandhya, f. (2016). Essentials of Practical Microbiology (1: a upplagan.). Jaypee Brothers Medical Publishers.
2. Bauman, r. (2014). Mikrobiologi med Deseodas by Body System (4: e upplagan.). Pearson Education, Inc.
3. Heritage, J., Evans, E. & Killington, a. (nitton nittiosex). Inledande mikrobiologi (1: a upplagan.). Cambridge University Press.
4. Morello, J., Granato, s. Wilson, m. & Morton, V. (2006). Laboratoriehandbok och arbetsbok i mikrobiologi: Applications to Patient Care (11: e upplagan.). McGraw-Hill Education.
5. Vasanthakumari, r. (2007). Lärobok av mikrobiologi (1: a upplagan.). B.Yo. Publikationer Pvt.