Dextrospotatis, beredning och användning

han Dextrospotatisagar Det är ett solid, icke -selektiv näringskulturmedium. I den kan bakterie- och svamparter växa, men dess användning indikeras särskilt för isolering av filamentösa svampar och jäst. Det är också känt som PDA -medium av uttrycket i engelska potatis dextrosagar.

Det är särskilt användbart för isolering av fytopatogena svampar, det vill säga de som påverkar grönsaker. För att så proverna från infekterade grönsaker, kan andra medier såsom sabouraud eller malt-agar användas, men för den rutinmässiga användningen föredras dextrose påven agar genom att erhålla genom att erhålla.

Aspergillus niger och sinemas i dextrose påven agar. Källa: Alextrevelian 006 på engelska Wikipedia [Public Domain]/Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenser/BY-SA/4.0)]

Det används också för räkning av svampkolonier i prover av kosmetika, läkemedelsprodukter och vissa mejerimat. Det är också gynnsamt att sådd hudskrapprover på jakt efter dermatofyter, som växer mycket bra i detta medium och utvecklar sina karakteristiska pigment.

Medium Dextrose Pope är ett mycket enkelt och enkelt medium att förbereda i laboratoriet. Den innehåller, som namnet antyder, potatisinfusion, dextros och agar -Agar. Dessutom kan hämmande ämnen läggas till för att undvika bakterietillväxt och öka selektiviteten för svamparter.

[TOC]

Grund

Dextrose Pope Agar är ett odlingsmedium som tillhandahåller nödvändiga näringselement för utveckling av filamentösa svampar och jäst.

Kombinationen av potatisinfusion med glukos ger den perfekta energikällan så att det finns en tillfredsställande tillväxt av svampar. Medan Agar är den som ger konsistensen för miljön.

Mediet ensam hämmar inte tillväxten av bakterier, därför är det ett icke -selektivt medium. För att göra detta behöver selektiva aggregatet av hämmande ämnen som vinsyra eller antibiotika.

Förberedelse

-Hemlagad (icke -Commercial) Papa Dextrose Agar

Petriplattor

Det är beredd på följande sätt:

För det första tvättas potatisarna mycket bra genom att ta bort det land de besitter. De skärs i fina skivor med allt och skal. 200 gr potatisen vägs och kokas i en liter destillerat vatten, i en halvtimme.

Tiden är färdig med filter eller sil hela beredningen genom gasväv.

Vätskan som erhålls är klar med destillerat vatten tills det når en liter. Infusionen tillsätts 20 gr agar -Agar och 20 gr dextros, blandas väl och autoklava vid 121 ° C, 15 pund tryck under 15 minuter.

Kan tjäna dig: coevolution

Låt svalna upp till 50 ° C och servera i sterila plattor. De förberedda plattorna hålls i kylen.

Kil

Du kan också förbereda dextrospotatiskilar.

I detta fall, innan sterilisering i autoklaven. Spara i kylskåp.

Mediet är vid ett pH på 5.6 ± 0.2, men vissa laboratorier lägger till 10% vinsyra för att sänka pH till 3,1 ± 0.1 i syfte att hämma bakterietillväxt.

I samma mening föredrar andra laboratorier att lägga till antibiotika för att göra det selektivt för odling av svampar och undvika bakteriell utveckling.

-Kommersiell förberedelse av Dextrose Pope Agar

Väg 39 gr kommersiellt tillgängliga dehydratiserade och upplöses i en liter destillerat vatten. Lämna i 5 minuter.

Blandningen upphettas genom omrörning ofta tills dess totala upplösning. Därefter steriliseras den i autoklav vid 121 ° C i 15 minuter.

Du kan förbereda plattor eller kilar. Fortsätt som beskrivits ovan.

PH är 5,6 ± 0,2. Om pH på 3,1 önskas, bör 14 ml sterarinsyra tillsättas till 20% innan du tjänar i plattorna.

Färgen på det oförberedda mediet är beige och beredd är klar bärnsten med ett något molnigt eller opalescent utseende.

Ansökningar

Process för plantering av växtprover i dextrospott

-För löv med fläckar

Bladen skärs i bitar.

I ett 50 cc -fartyg med 50% alkohol, placera bladens bitar (färgade och friska bitar) för att desinficera ytan med 20 till 30 sekunder. Kasta alkohol och tillsätt natriumhypoklorit 20% i 40 till 50 sekunder om de är fina blad och ökar tiden till 80 sekunder om det är bark och stammar.

Kasta natriumhypokloriten och ta de desinficerade bitarna med en steril klämma och placera dem på mediumytan (högst 10 bitar). Placera datumet och inkubera från 20 till 30 ° C.

-För frukt och knölar

Om frukten är köttig, öppna frukten som påverkas av svampen och ta bitar med en steril skalpell, både den sjuka och den friska delen och placera den på agarens yta.

Om frukten är citrus, till exempel en citron eller en apelsin, måste dess frön öppnas och så.

Kan tjäna dig: fosfatidylinositol: struktur, träning, funktioner

När fruktytan påverkas och sporing observeras är idealet att använda den rivna metoden på plattan; Detta består av att spela den spororiska med en steriliserad och kyld "L" -formad spatel och sås sedan i sicksack 2 till 3 gånger på agar.

-För korn

De desinficerar samma som beskrivs i bladen och placeras därefter på agaren.

-För grenar och stjälkar

En Raspecue av cortex utförs och sedan tas bitar av den friska och sjuka delen och sådd direkt på agaren.

Plack som planteras inkuberas vid aerobios vid 20-30 ° C under 72 timmar.

Process för plantering av hudskalor, hår eller naglar på Dextrose Pope Agar

Provet ska utföras med ett skalpellark nr 11, antingen för att klippa drabbat hår, hud eller nagelvåg på jakt efter dermatofyter. Innan provet tar provet måste området med 70% alkohol desinficeras.

-Hudprov

I bedrägeriet måste skadan kanten skrapas, för där är det mer troligt att hitta svampen.

I exsudativa lesioner tas provet med torr eller våt sopor. Så omedelbart över påven dextrose eller sabouraud agar. Undvik transportmedel.

Ett annat provtagningsmetod är genom tekniken för Mariat och Ada Campos matta fyrkant. I detta fall gnuggas det drabbade området 5 gånger med en bit steril ull för dess efterföljande gröda.

Provet kan placeras direkt i odlingsmediet.

-Hårprov

Beroende på patologi kan den drabbade delen eller rotstarten skäras. Placera provet i odlingsmediet.

-Nagelprov

De kan skrapas eller klippa en specifik del av den drabbade nageln. Kommer att bero på typen av skada.

Skär provet i bitar på 1 mm innan du sådd för att öka sannolikheten för svampkontakt med odlingsmediet.

Identifieringsförfarande

De kolonier som erhållits i plattan är isolerade i rör innehåller.

Den mikroskopiska studien (observation av strukturer och deras formationer) kan göras genom mikrokulturer eller direkt observation till mikroskopet mellan ark och lamella.

Kan tjäna dig: histidin: egenskaper, struktur, funktioner, mat

Kolonier räknas

Detta medium kan också användas för att bestämma belastningen av svampar och jäst som finns i växtprover, mat, kosmetika eller droger. För detta ändamål används potatispotatis kompletterad agar med antibiotika, till exempel: (kloramfenikol, klorotetracyklin eller båda).

Häll 1 ml av provet - företrädesvis utspädd - på en steril och tom petriskylt, smälter sedan en dextrospotatispistol och låt den svalna vid 45 ° C. Häll över petriskylten och rotera tills den homogeniseras. Lämna i vila tills.

Inkubera vid aerobios vid 20-25 ° C (formar) eller vid 30-32 ° C (jäst) under 5 till 7 dagar eller mer, beroende på vilken typ av svamp som söks och typen av prov. Två plattor kan användas för att inkubera båda temperaturintervallen.

Professor i svampkolonier i ett urval av mat. Dextrospotatisagar kompletterat med antibiotika. Källa: Pxhere.com foto/777267

Underhåll av svampstammar

Dextrose Pope Agar kan användas för att upprätthålla livskraftiga svampstammar i flera år.

För detta odlas svampen i dextrospotatisilar och när svampen har odlats är den täckt med mineralolja. Oljan måste steriliseras i autoklav i 45 minuter och ha en ungefärlig viskositet på 300 till 330 Saybolt. Oljan måste överstiga 1 till 2 cm spetsen på ramen.

QA

Från varje förberedd parti måste 1 eller 2 plattor tas och inkuberas vid 25 ° C under 48 timmar eller 20 ° C under 96 timmar. Bra sterilitetskontroll är en där koloniernas utveckling inte observeras.

Du kan också använda kända eller certifierade kontroller som:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton Mentagrophytes ATCC 9533. I alla fall förväntas god tillväxt.

Referenser

1. Britania Laboratories. Glycosado. 2015. Finns på: Britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Dextrospotatis. Finns på: FoodSafety.Neogen.com
3. Insumolablaboratorium. Dextrospotatisagar. Finns på: Insumolab.Kli
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 ed. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.
5. Hushus g. Allmän mykologi. 1994.  2: a upplagan. Central University of Venezuela, biblioteksutgåvor. Venezuela caracas.
6. Aceituno m. Utvärdering av mikrobiologisk kvalitet i ögonskugga, kompakt dammtyp av ett nationellt produktionslaboratorium, enligt Pharmacoea USP 2005. Avhandling för att välja titeln på farmaceutisk kemist. University of San Carlos i Guatemala.
7. Cuétara m. Bearbetning av ytprover. Ibero -amerikansk mykologi tidningen. 2007; pp. 1-12