Biuret Foundation, reagens, procedur, användningar

han Biur Det är ett reagens som används för att bestämma lång kedja och kortkedjeproteiner. Det används särskilt inom området analytisk kemi och uroanalys för att undersöka koncentrationen av totalt serum-, plasma- och urinproteiner.

Proteinvärden kan ökas eller minskas i vissa patologier. Hipoproteinemias bilder presenteras vanligtvis hos patienter med njursjukdom, hos undernärda och hos patienter med kroniska infektioner.

Kemisk struktur av komplexet som bildas i Biuret -reaktionen Positiv Biuret -test. Källa: Yikrazuul [Public Domain]/Flickr

Medan hyperproteinemia observeras i patologier såsom multipel myelom, systemisk lupus erythematosus, bakteriell endokardit, bakteriell meningit, waldenström makroglobulinemi, bland andra, bland andra.

Å andra sidan beror närvaron av proteiner i urinen på albuminfiltrering av njurarna. Detta är ett patologiskt beteende som måste studeras.

I detta avseende är Biuret mycket användbart, eftersom det tillåter kvantifiering av närvaron av serumproteiner, plasma, urin, bland många andra prover.

Till och med Biuret kan användas för att undersöka närvaron och koncentrationen av proteiner i okända eller okända kompositionsprover. Därför används det allmänt inom forskningsområdet.

Biuret -testet är baserat på att detektera peptidlänkar. Testet ges i alkaliskt medium. Provet måste innehålla minst två peptidlänkar så att ett violett-kraftfärgkomplex kan bildas. Komplexet bildas av föreningen mellan länkarna och kopparens jon.

[TOC]

Grund

Biuret -reagenset består av kaliumhydroxid, kuprisk sulfat och natrium och kaliumtartato. Natriumhydroxid används för att alkalisera miljön, eftersom detta tillstånd är nödvändigt för att reaktionen ska inträffa.

Ämnen som reagerar med proteiner är cupric sulfat, medan natriumtartrat har funktionen att inte tillåta kopparhydroxidbildning, som tenderar att fälla ut och stör reaktionen.

Kan tjäna dig: jäsning: historia, process, typer, exempel

Om det finns ämnen i provet som har peptidbindningar (polypeptider eller proteiner) kommer testet att ge positivt.

En reaktion tolkas som positiv när lösningen blir violett. Färgen produceras genom bildandet av ett komplex mellan minst två peptidbindningar som har CO-NH-gruppen och de nuvarande kopparkatjonerna.

Det violetta komplexet kan bildas på två sätt: det ena beror på förlusten av protoner i de bland grupperna som binder till metall (grov) och den andra genom föreningen av syre- och kvävelektroner som är fria och binder med koppar.

Denna reaktion kan variera i intensitet och färg beroende på typ av protein.

Testet kan utföras kvalitativt eller kvantitativt. I den kvalitativa formen rapporteras det som positivt eller negativt. I den kvantitativa formen kan koncentrationen mätas med den spektrofotometriska metoden.

Reaktionen läses mellan 540-560 nm. Färgintensitet är direkt proportionell mot koncentrationen av peptidlänkar i provet.

Reagens

-Natriumhydroxid (NaOH) vid 20%

-1% pentahydrat cupric sulfate (cuo₄. 5 timmar₂ANTINGEN)

-Blandat natrium och tetrahydrat kaliumtartrati (KAC₄H₄ANTINGEN₆· 4h₂ANTINGEN)

Biuret reagensstabilitet

-Det måste hållas i kylning.

Procedur

Metod

-Placera 100 | il provet eller mönstret som ska analyseras i ett provrör.

-Tillsätt 2 ml natriumhydroxid.

-Blanda mycket bra.

-Tillsätt 5 ml Biuret -reagens.

-Blanda och lämna 25 minuter vid rumstemperatur, täck och skydda mot ljus.

-Observera formationen eller inte av färg och mäta spektootometriskt.

Kalibreringskurva

För att utföra kalibreringskurvan kan du använda serumbovint albumin som ett mönster. Flera koncentrationer framställs från den. Till exempel 25, 50, 75, 100, 125 och 150%.

Reaktionen är monterad med alla dessa kända koncentrationer och absorbansen läses till en våglängd av 540 nm. Med uppgifterna från de kända koncentrationerna och de absorberande avläsningarna utförs kalibreringskurvan.

Det kan tjäna dig: Kinas flora och fauna: representativa arter

I varje bestämning eller många bearbetade prover är det tillrådligt. Som kalibreringsmönster kan du använda serum bovint albumin 0,1-2 mg/ml.

Mätningar görs i en 540 nm spektrofotometer.

Linearitet uppfylls upp till en koncentration av 12 g/dl.

Interferens

Ämnen som stör i Biuret -testet

Även om det inte är särskilt frekvent, bör det noteras att under genomförandet av detta test kan vissa ämnen störa. Till exempel kan närvaron av ammonium hämma färgbildning.

På samma sätt kan andra ämnen ta upp samma våglängd, till exempel vissa pigment.

Å andra sidan kan en störning genereras när ett annat ämne än peptidlänken bildar ett komplex med metallsalt. Exempel: Vissa kolhydrater och vissa lipider.

I händelse av att den visar det för att analysera någon typ av fällning måste den filtreras eller centrifugeras innan testet ställer in.

Ämnen som inte stör i Biuret -testet

Testet påverkas inte av närvaron av:

-Bilirubin upp till en koncentration av 20 mg/dl.

-Hemoglobin till en koncentration av 750 mg/dl.

-Dextran till en koncentration av 30 g/l.

-Triglycerider upp till en koncentration av 4000 mg/dl.

Fördelar

-Det är en enkel metod för att utföra.

-Det är ett ekonomiskt test.

-Det har hög proteinspecificitet.

-Få störningar.

Nackdelar

Det har liten känslighet för att upptäcka låga mängder proteiner. Det arbete som utförs av Fuentes och kollaboratörer bekräftar att Biuret -testmetoden har en 1 mg/ml detektionsgräns för protein och en kvantifieringsgräns på 3 mg/ml.

En annan forskning som genomförts vid University of Amazon rapporterar emellertid mycket lägre värden. Detektionsgränsen som studierapporterna är 0,020 mg/ml och kvantifieringsgränsen för 1.33 mg/ml.

Ansökningar

Biuret -reagens eller test används för proteinbestämning i kliniska och icke -kliniska prover i rutinmässiga och forskningslaboratorier.

Kan tjäna dig: egenskaper hos levande varelser

Patologier som studerar eller minskade Proteiner

I många patologier är det viktigt att bestämma koncentrationen av totala proteiner i kliniska prover, att kunna vara hög eller minskad.

De är upphöjda i:

-Flera myelom,

-Systemisk lupus erytematosus,

-Bakteriell endokardit,

-Bakteriell meningit,

Waldestrom makroglobulinemi, bland andra.

Det minskas i:

-Njurinsufficiens,

-Personer med svår undernäring,

-Patienter med kroniska infektioner, bland andra.

Kliniska prover

De vanligaste kliniska proverna är serum, plasma och urin. Det normala värdet av serum- eller plasmaproteiner är 6.0-8.8 gr/dl.

Proteinkoncentration hos vuxna hos vuxna överstiger inte 150 mg/24 -timmars siffran.

Normalt värde på urin/kreatininproteinindex i urin

Spädbarn: < a 0,50 mg

Barn 2 år och äldre: Index: 0,20 mg

Vuxna: < 0,2 mg

Icke -kliniska prover

Biuret -reaktionen kan användas för många typer av icke -kliniska prover, såsom mejeriprodukter, antiofidsera eller något okänt ämne som närvaron av proteiner är ville undersöka.

Referenser

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez och. (2014). Fysikalisk-kemisk karakterisering och proteininnehåll i vätskextrakt av Mangrove Ostrion (Crassostrearizophorae). Kubansk journal för kemi, 26 (1), 66-74. Hämtad 26 juni 2019 från http: // scielo.Sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Funktionell karaktärisering av mandel av mangofrön (Mangifera indikerar L.) Utvecklingsvetenskapsmagasin. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, fri encyklopedi. 19 juni 2019, 16:37 UTC. 26 juni 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Biuret Method Standardization för att kvantifiera totalt protein i multi -syftet antibotropiskt serum som produceras vid National Biologic Products Center. Bol - Inst Nac Health 2012; 18 (11-12).  Finns på: arkiv.Insatser.Gabb.pe
5. WINER Laboratories. Totala proteiner. Kolorimetrisk metod för att bestämma totala serum- och plasmaproteiner. Finns på: Wiener-Lab.com.ar