Malonatbuljong, förberedelser och användningar

han Malonato buljong Det är det flytande odlingsmediet som används för diagnostiskt test (Malonato -test), som används för att differentiera vissa genrer från Enterobacteriace -familjen. Det skapades av Leifson i 1.933 och därefter modifierad av Ewing, som tillförde en liten mängd dextros och jästextrakt till den ursprungliga formeln.

Mediet består för närvarande av jästextrakt, ammoniumsulfat, dipotassiumfosfat, monopotonisk fosfat, natriumklorid, natriummalonat, dextros och bromotimolblått. Detta test ingår vanligtvis i det biokemiska identifieringsbatteriet för enterobakterier, vilket hjälper till att differentiera vissa släkter och arter.

Grafisk representation av malonato -testet. TILL. Negativt test, b. (Försurning) Negativt test, c. (Mellanalcalinisering) Positivt test. Källa: Public DomainPicures färgade rör.netto

Malonato -testet är främst baserat på förmågan hos vissa mikroorganismer att använda natriummalonato som en enda kolkälla och som en källa till kväve till ammoniumsulfat.

Malonato -testet ger vanligtvis positivt i vissa arter av genrerna Enterobacter, Klebsiella och Citrobacter. Medan de flesta arter av genrerna Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus och Providencia, ger negativ reaktion.

[TOC]

Grund

Malonate Test består i bevis.

De flesta enterobakterier som inte använder malonato kan växa i detta medium och tar som näringsämnen dextros och jästextrakt.

I detta fall kommer alla alkaliseringsförsök på grund av användning av peptoner att motverkas genom produktion av syror som genereras genom jäsningen av dextrosen. På samma sätt fungerar dipotassium- och monopotasfosfaten som en buffert som håller pH vid 6.7.

Det kan tjäna dig: runt Donax

Det är därför, när testet är negativt, är buljongen samma ursprungliga färg (grön). Sällan kan mediet surgöras på grund av jäsningen av dextrosen; Utan användning av Peptonas och pH -indikatorn skulle jag vända färgen från medium till gult. För detta måste pH gå ner till 6.

Nu, när detta test är positivt att mikroorganismen använde malonato och ammoniumsulfat som kol respektive kvävekällor utan att använda de andra komponenterna.

I detta fall är mediet alkaliserat på grund av befrielsen av natrium och den därmed NaOH -bildningen. I denna mening vänder pH -indikatorn (bromotimolblå) färgen på mitten av grönt till blått när pH är lika med eller större än 7,6. Blå kan vara tydlig eller intensiv (Preussen blå).

Slutligen upprätthåller natriumklorid osmolariteten hos mediet och vatten är utspädningen av alla komponenter.

Tolkning

Buljong av samma färg (grön): negativt test

Gul buljong: Negativt test

Tydlig eller intensiv blå buljong: positivt test

Det finns en variant som kallas malonato fenylalaninbuljong, även kallad Shaw och Clarke Medium. I detta fall kan två tester analyseras, användningen av malonato som en kolkälla och produktion av pyruvinsyra från fenylalanin.

Förberedelse

Malonato buljong

Mängden gram som anges genom insatsen för det valda kommersiella huset väger (det kan variera från en till en annan). Tunga gram är upphängda i en liter destillerat vatten. Värm något tills dess fullständiga upplösning. Distribuera 3 ml av mediet i 13/100 provrör med bomullslock.

Sterilisera i autoklav vid 121 ° C i 15 eller 20 minuter.

Häftigt. Om de inte kommer att användas omedelbart, spara i kylen förrän du. Tempererar buljongerna vid rumstemperatur innan du inokulerar dem.

Kan tjäna dig: giptodon

Medium pH måste vara 6,7 ​​± 0,2. Färgen på det beredda mediet är flaskgrönt.

Malonato fenylalaninbuljong

Väg 11 gr av det dehydratiserade mediet och upplöses i 1 liter destillerat vatten. Resten av förberedelserna lika med den som beskrivs ovan.

Det kan också framställas genom att tillsätta 2 gr/l fenylalanin till malonato -buljongen innan det steriliseras.

Använda sig av

Det används som en del av det biokemiska testbatteriet som är monterat för identifiering av bakterier i Enterobacteriaceae -familjen.

Hjälpa till att skilja mellan:

-Släktet Klebsiella och Enterobacter (+) från släktet Escherichia och Serratia (-).

-Arten av SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP, Ssp ssp salame salmonella Salmonella enterica ssp diarizonae (+), av arten Salmonella enterica SSP enterica (-).

-Av släktet Klebsiella generellt (+) av släktet Actinobacillus (-).

-Ibland kan det hjälpa differentieringen av genrer och arter av bakterier som inte tillhör familjen Enterobacteriaceae, som bland icke -fermenterande gram negativa baciller Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Källa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.

Procedur

Under en tändare tas en del av en ren koloni med hjälp av ett ordentligt steriliserat och kylt platinahandtag. Provet taget (lätt inokulum) upplöses i malonato -buljongen. Det inkuberas med det lata locket vid aerobios vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar.

Du kan också ympa Malonato -buljongen från en gröda på 18 - 24 timmar i Triptyse Soy Broth. I detta fall tas 0,01 ml med en steril pipett och malonato -buljongen inokuleras. Det inkuberas med det lata locket vid aerobios vid 35 ° C ± 0,2 under 24 till 48 timmar.

Kan tjäna dig: sekundära konsumenter

Avslutade tiden resultaten tolkas. Varje vestige av blå färg som är fullbordad 48 timmars inkubation bör betraktas som positiv. Testet bör inte tolkas som negativt förrän den 48 timmars inkubationstiden har uppfyllts.

När det gäller att använda malonato-fenylalaninbuljongvarianten tolkas malonato först och sedan tillsätts 5 droppar HCl 1N och 3-5 droppar 8% järnklorid. En mörkgrön färg tolkas som ett positivt test för fenylalanin. Om mediet tvärtom blir ljusblå är testet negativt för fenylalanin.

QA

För att utföra sterilitetskontrollen av mediet måste en eller två buljonger inkuberas vid 35 ° C ± 0,2 för 24 timmars inkubation. Efter denna tid bör det inte finnas någon turbiditet eller färgförändring.

För kvalitetskontroll kan du använda kända eller certifierade stammar, till exempel: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP ATCC 13314 och Escherichia coli ATCC 25922.

De förväntade resultaten är:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae och SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP De ger en positiv reaktion (halvblå).
• För Escherichia coli Resultatet måste ge negativt, det vill säga det förväntas att det inte finns någon färgförändring (grön) eller att det blir gult på grund av glukosfermentering.

Begränsningar

Använd inte buljong som visar grumlighet, fällningar, färgförändring eller något tecken på försämring.

Referenser

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologisk isolering av Salmonella spp. och molekylära verktyg för detektion. Uninorte Health. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Finns på: Scielo.org.co
2. Bbl. Malonate buljong, ewing modifierad. 2007. Finns på: BD.com
3. Senna Laboratories. Malonato buljong. Finns på: Scientific.com
4. Renylab. Malonato buljong. 2013. Finns på: detta.Renylab.ind.Bras
5. Mbiologi diagnostik. Malonato buljong. Finns på: mbiologi.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.
7. Condra pronadisa laboratorier. Malonato fenylalaninbuljong. Finns på: Condalab.com