Tincion of Capsula Foundation and Techniques

De kapselfärgning Det är en differentiell färgteknik som äger egenskapen att lyfta fram polysackaridstrukturen som omger vissa bakterier och jäst som kallas kapsel. Det används i kliniska laboratorier för att hjälpa diagnosen vissa patologier orsakade av kapsulerade mikroorganismer.

Det används också för att undervisa laboratorier för demonstration av denna morfologiska struktur för studenter i hälsovetenskapskarriärer, till exempel: medicin, bioanalys, omvårdnad eller cytoteknologi, bland andra.

Klebsiella pneumoniae smet färgad med kapselfärgning. Indisk bläckmetod med safranin. Källa: а.En.В [public domain]

Det finns flera enkla tekniker för att demonstrera närvaron av kapseln i mikroorganismerna som har den, dessa är: den negativa färgningen, färgningen av Anthony och en variant som kombinerar de två föregående två.

Negativ färgning används främst i CSF -prover när närvaron av jäst misstänks Cryptococcus neoformans. Denna jäst är ofta orsak till meningit.

Denna teknik använder nigrosin eller kinesisk bläck och är baserad på att skapa en kontrast mellan beredningsbotten och den ogenomträngliga kapseln för mikroorganismen. Bakgrunden är färgad mörk och kapseln är färglös. På detta sätt markeras denna struktur.

När det gäller Anthony -tekniken kan det sägas att den mest används för att undervisa laboratorier för att demonstrera polysackaridstrukturen i bakterier, såsom Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae och Neisseria meningitidis.

Användningen av denna teknik för diagnostiska ändamål är mycket sällsynt, eftersom det finns andra rutinprov som gör att dessa mikroorganismer kan identifieras.

[TOC]

Grund

Kapseln är en stark struktur av en polysackarid natur. Detta skyddar fagocytos mikroorganismer och är därför en svår struktur att penetrera.

Det är därför kapslar fläckar är baserade på kontrast. Färgämnen fläckar botten av beredningen medan kapseln är färglös.

Därför är kapseln med dessa tekniker lätt att känna igen. Om mikroorganismen inte har en kapsel kommer den inte att kan skiljas med denna typ av färg, eftersom allt kommer att färgas från samma färg.

Det kan tjäna dig: homologa och analoga strukturer (med exempel)

Alla tekniker som används för att färga kapseln har samma grund även om de använder olika färger och procedurer.

Tekniker partill färgningen av kapseln

-Anthony -färgning

Anthony's färgning använder det violetta glaset som ett färgämne. Detta kommer att färga bakteriekroppen och den violetta färgbakgrunden.

Å andra sidan används 20% kopparsulfat. Detta fungerar som en tvättlösning, det vill säga att det tar bort det överskottsglaset i beredningen, vilket får kapslarna att klargöra men utan bakteriekroppen eller bakgrunden förlorar färgen.

Materiel

- Kortvarig mjölk.

- Bärbar lamina.

- 1% violett glas.

- 20% kopparsulfat.

- Optisk mikroskop.

- Nedsänkningsolja.

Procedur

Denna teknik består av:

1. Odla mikroorganismen i linjerolate mjölk i 36 timmar.
2. Placera en droppe av grödan i slutet av ett objekthållarark och bredvid placera en droppe violett glas, blanda och sträcka dig med slutet av en annan bild.
3. Utomhus och inte fixa värmen.
4. Tvätta med 20%kopparsulfatlösning, släpp ut utomhus.
5. Observera mikroskopet med nedsänkningsmål. Sök mot ytterligheterna i det utökade.

Det är viktigt att inte använda värme eller fix eller torka, eftersom detta skadar kapseln. Inte tvätta med vatten.

Tolkning

Kortad mjölk är ett utmärkt odlingsmedium eftersom det tillhandahåller nödvändiga näringsämnen för mikroorganismen för att utveckla en framträdande kapsel.

Å andra sidan kommer litolent mjölk att bilda en tjock och kompakt bakgrund som kommer att färgas violet tillsammans med bakteriekroppen, men kapseln som omger mikroorganismen är färglös. Därför observeras en klar halo runt bakteriekroppen.

Kan tjäna dig: faktorer som påverkar enzymatisk aktivitet Grafisk representation på den mikroskopiska observationen av en utstrykning av Klebsiella pneumoniae färgade med färgningen av Anthony. Källa: Tillverkad av författaren MSC. Marielsa Gil.

Fördelar

Det är en enkel teknik att utföra. Det kräver inte fixering.

På samma sätt bör det noteras att andra kulturmedier kan användas, men mediet med mjölk föredras eftersom det har fördelen att det ger mer framträdande kapslar.

Nackdelar

Det är lite mer mödosam teknik än negativ färgning, och för visualisering kräver det att du väntar på att förberedelserna ska torka.

-Negativ färgning

Materiel

- Skjutark.

- Kulturmedium med mikroorganism.

- Kinesiska eller nigrosinfärg.

- Optisk mikroskop.

- Fysiologisk saltlösning.

Procedur

Placera en droppe fysiologisk saltlösning på locken och lösa upp en liten del av den mikrobiella grödan. Det är viktigt att förberedelserna inte är särskilt tjock. Placera sedan en droppe kinesisk eller nigrosinbläck och blanda.

Sedan placeras ett täckark på beredningen utan att överskrida vätskan. Det observeras vid mikroskopet som fokuserar först på 10x mål och går sedan till 40x.

Denna teknik kan också användas på CSF -prover direkt. Det vill säga istället för att placera en droppe mikrobiell kultur, placeras en droppdroppe.

Fördelar

Det är en enkel metod för att utföra och samtidigt ekonomisk. Det kräver inte fixering eller torkning av beredningen.

Nackdelar

Det har som en nackdel att den bör observeras vid mikroskopet innan beredningen torkar, för om detta inträffar kommer mikroorganismer att sammandras, vilket kommer att göra visualisering svår.

Å andra sidan kan falska positiver uppstå om analytikern är oerfaren, eftersom leukocyter vanligtvis förvirrar jäst.

Observationen av jäst med kapsel med den kinesiska eller nigrosintekniken bör betraktas som en presumtiv diagnos av Cryptococcus neoformans Tills det demonstreras med odling.

Detta beror på att det finns andra jästar som kan vara orsaken till meningit och inte bara Cryptococcus neoformans, till exempel släkten Candida och Rhodotorula, liksom andra arter av Cryptococcus.

Kan tjäna dig: acetylkoenzym till

Tolkning

Om det finns kapsulerade mikroorganismer kommer en mörk bakgrund att observeras, med transparenta kroppar som flyter i vätskan, vilket belyser närvaron av kapseln.

Cryptococcus kapsel neoformans färgade med kinesiskt bläck. Källa: Fotokredit: Innehållsleverantörer: CDC/DR. Leanor Haley [Public Domain]

-Indisk bläckteknik

Denna teknik kan också göras med nigrosin. Det är en kombination av de tekniker som tidigare förklarats. Denna teknik använder Violet Crystal och India eller Nigrosins Ink.

Bakteriekroppen tar den lila färgen på det violetta glaset eftersom det är negativt laddat, medan nigrosinfärgen färgen på smet. Om bakterien har en kapsel kommer det att ses som en transparent gloria runt mikroorganismen.

Violet Crystal kan ersättas av någon av dessa färg: Safranin, Basic Fuchsin eller Methylen Blue.

Materiel

- Violetta glas.

- Nigrosin eller indiskt bläck.

- Skjutark.

- Mikroskop.

Procedur

- Odla mikroorganismen i ett odlingsmedium.

- Placera en droppe av grödan i slutet av ett glidark och bredvid placera en droppe indisk eller nigrosinbläck, blanda och sträcka dig med slutet av en annan bild.

- Lufttorka och inte fixa värmen.

- Täck med en violetta glaslösning per 1 minut, tvätta med destillerat vatten men mycket delikat (Soft Jet), släpp ut utomhus.

- Observera mikroskopet med nedsänkningsmål. Sök mot ytterligheterna i det utökade.

Tolkning

En violetta bakteriekropp och en mörk bakgrund kommer att observeras. Kapseln, om den är närvarande, kommer att vara färglös runt bakterierna.

Referenser

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Grundläggande mikrobiologitekniker. Bakterier. Minska (biologi). Mikrobiologiserie. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-CendeJas R. Grundläggande färgning i mikrobiologilaboratoriet. Mediegrafisk.org. 2014; 3 (1): 10-18. Finns på: Medigrafisk.com
3. Gil m. Negativ färgning: grund, teknik, fördelar och nackdelar. Lyfttagare.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 ed. Argentina. Pan -amerikanska redaktionella.TILL
5. Tankeshwar a. Kapselfärg: Princip, procedur och resultat. 2019. Guide för medicinsk mikrobiologi. Finns i: MicroBeonline.com