Hematoxylin-eosinfärgningsegenskaper, användningar, tekniker

De Hematoxylinfärgning - Eosin Det är en färgteknik som använder kombinationen av hematoxylin och eosinfärgämnen. Detta par färgämnen gör en perfekt duo, eftersom hematoxylin fungerar som ett grundläggande färgämne och eosin är ett surt färgämne.

Beteckningen av basiska eller sura färgämnen hänvisar inte till pH som de får i lösning, utan talar snarare om den andel som råder i termer av anjoniska eller katjoniska belastningar de har eller genom kromoforens placering.

Cylindriskt epitel färgat med hematoxylin - Eosin (HE) Källa: Todd Straus och Vladimir Osipov [CC av 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenser/av/3.0)]

I detta avseende betraktas hematoxylin som ett grundläggande (katjoniskt) färgämne och har därför en affinitet för syrastrukturer, såsom kärnan i cellerna. Medan eosin är ett surt (anjoniskt) färgämne har en affinitet för alkaliska eller basiska strukturer, såsom cellcytoplasma.

Av denna anledning används denna kombination av färgämnen i stor utsträckning för att färga. Kärnorna är färgade mörkblå eller lila och den rosa cytoplasma.

Hematoxylin-eosinfärgning är en av de mest använda färgteknikerna inom området histologi och cytologi på grund av dess enkla hantering och låga kostnader. Det används för visualisering av celler, tjocka nervfibrer och närvaron av vissa vävnadsmikroorganismer, såsom: parasiter, svampar och bakterier, bland andra.

[TOC]

Egenskaper

Hematoxylin

Hematoxylin är ett neutralt färgämne. Komponenten som ger färg (kromofor) är emellertid belägen i molekylens katjoniska eller grundläggande centrum. Därmed dess affinitet för sura strukturer. Dess kemiska formel är c₁₆H₁₄ANTINGEN₆ och hans vetenskapliga namn 7.11b-dihydroindeno [2,1-c] Chromenen-3, 4.6A, 9,10 (6H) -Pentol.

Håll cellernas centra främst, eftersom dessa är mycket rika på nukleinsyror. Du kan också färga cytoplasmiska inneslutningar av viralt ursprung.

Så att hematoxylin kan färgämne måste vara i ett oxiderat tillstånd och fäst vid en metall. Det senare kommer att tjäna till att titta på tyget, det vill säga det kommer att fungera som en mordant.

När hematoxylin oxideras kallas hematein. Oxidation uppnås genom exponering för syre (åldrande) av reagenset eller genom ämnen som hjälper dess oxidation (kemisk oxidation).

Det kan tjäna dig: metoder för separering av heterogena blandningar

Eosina

Eosina är en färgröd eller rosa. Det är olösligt i vatten även om det finns en hydrosoluble version. Generellt förbereder Eosina upplösning av alkohol (etanol vid 95).

Fläckcytoplasmer, muskelfibrer, cytoplasmiska organeller och kollagen, men färgar inte cellcentra. Detta beror på att det är negativt laddat, därför har den en affinitet för positivt laddade strukturer.

Det finns två typer av Eosina "Y" och "B". Eosina "y" är känd som gul eosina. Dess vetenskapliga namn är tetrabrome fluorescein och dess kemiska formel är c_tjugoH₈Bras₄ANTINGEN₅.

Å andra sidan kallas Eosin "B" ibland blåaktig erytrosin B. Det vetenskapliga namnet är dibromodinitro fluorescein och formeln är c_tjugoH₈Bras₂N₂ANTINGEN₉. Båda är väldigt lika och skillnaden i att använda det ena eller det andra är inte riktigt märkbart. Men det mest populära är Eosina "Y".

Eosin har egenskapen att skilja mellan en levande och död cell, eftersom det bara kan korsa membranet för att färga dess cytoplasma när cellerna är döda, vilket lämnar cytoplasma i den färglösa cellen om den förblir levande.

Ansökningar

Nervfiberfärgning

Med hematoxylin-eosin kan tjocka nervfibrer färgas och identifieras. Det är emellertid inte användbart att färga de tunna nervfibrerna, för för att visualisera det senare behövs en silverfärgning.

Tinions av histologiska hudskärningar

I fläckarna på hornhinneskiktet i huden är färgämnet som verkar eosin, eftersom cellerna på denna nivå inte har en kärna.

I granulosskiktet i huden fläckar hematoxylin starkt till de kerathialinggranuler som finns i de granulära cellerna. Tvärtom, det torniga skiktet i huden färgas svagt med hematoxylin, medan basal- eller groddskiktet om det är ganska färgat.

Eosin fläckar cytoplasma för alla celler och färgintensitet kan variera mellan ett lager och ett annat.

Färgning med hematoxylin-eosin

Gómez och kollaboratörer, 2005 visade de att färgning med hematoxylin -eosin var mer effektivt för att identifiera fall av amibiasis genom Entamoeba histolytica och Entamoeba skiljer sig att den färska visualiseringsmetoden (saltlösning och Lugol -lösning) hos patienter med akut diarrésjukdom.

Kan tjäna dig: Sekundär alkohol: Vad är, struktur, egenskaper, användningar

Det visades också att det har stor känslighet för att upptäcka erytrofagocytos (amoebas som har fagocyterytrocyter).

Färgning av histologiska snitt för diagnos av infektion

Walwyn och kollaboratörer föreslog de 2004 användningen av histologisk färgning för att upptäcka mikroorganismer som orsakar infektioner.

Med hjälp av färgningen av hematoxylin-eosin lyckades visualisera infektioner orsakade av Clostridium, Aktinomyces, Spirile eller Candida. De lyckades också observera närvaron av parasiten Sarkopter escabiei I läderskärningar och viral inneslutningar av cytomegalovirus och herpes i snitt av olika vävnader.

Tekniker

För histologiska prover

Färgningen av histologiska snitt går igenom en serie steg. Den första är att få den histologiska skärningen. Detta måste vara parafied och sedan få nedskärningarna (ultra-fin) med en mikrotom. Tekniken består av följande steg:

1-malming av överflödigt paraffin: Xilol eller Hemo -D kan användas, sänk i 3-5 minuter.

2 Relief av provet: Detta uppnås genom att fördjupa provet i olika koncentrationer av alkoholer (etanol) i fallande ordning (100 °, 90 °, 70 °). I alla fall i 7 minuter.

3-eliminering av överskott av alkohol: För att göra detta är det nedsänkt i vatten i 7 minuter.

4-samling med hematoxylin: Provet är nedsänkt 6-10 minuter på ett bricka som innehåller hematoxylin. Exponeringstiden beror på provets storlek och tjocklek.

5-eliminering av överskott av hematoxylin: Vatten tvättades i 5 minuter och sedan tillverkas en snabb passage (10-20 sekunder) av sur alkohol. Tvättades därefter med vatten igen i 5 minuter. Sedan nedsänkt i etanol vid 96 ° per 1 minut.

6-färg med Eosina: För att göra detta är provet i 5 minuter i Eosina -brickan nedsänkt.

7-deshydrering av provet: För att göra detta passeras alkoholbrickorna (etanol) igen, men den här gången i stigande ordning. (70 °, 90 °, 100 °). (I 5 sekunder, 5 sekunder, 1 minut respektive).

8-provförklaring: Detta utsätts för xylolen i 5-10 minuter och torkar för att permanent täta med Kanada balsam eller annat liknande material.

För avföringsprover på jakt efter OCH. histolytisk

I en lamelle en längre med patientens avföring och är fixerad med 80% alkohol i 5 minuter. Arket är nedsänkt i hematoxylin i 5 minuter och tvättas omedelbart med vatten.

Kan tjäna dig: bidrag från kemi till medicin

Därefter är det snabbt nedsänkt i sur alkohol och sedan i ammoniacal vatten. Tvätta med vatten. Den är färgad i 5 minuter i Eosina. Provet är dehydratiserat som förklarats i den tidigare tekniken och klargörs slutligen med Xileno.

Reagensförberedelse

- Hematoxylin

Lös 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat i en liter destillerat vatten. När du är helt upplöst, tillsätt 1 gram kristalliserat hematoxylin. Vid upplösning i sin helhet tillsätts 1 gr citronsyra tillsammans med 50 gr klorhydrat och 0,2 gr natriumjodinus.

Blandningen kokas i 5 minuter, då får det svalna och filtreras för att eliminera de fasta partiklarna som har förblivit. Det således reagenset kan användas omedelbart.

- Eosina

Det kan framställas med alkoholhaltig eller vattenhaltig bas.

Alkoholhaltig eosin

I 100 ml etanol vid 95 ° upplöses 0,5 gram Eosina "Y". Tillsätt sedan några droppar glacialt ättiksyra.

2% vattenhaltig eosin

I 1250 ml destillerat vatten löser upp 25 gram eosin "y" hydrosoluble. Tillsätt sedan några droppar glacialt ättiksyra.

Sura alkohol

Mät 0,5 ml koncentrerad saltsyra och komplett 100 ml med absolut alkohol.

Ammoniakvatten

Mått 0.5 ml koncentrerad ammoniak och komplett 100 ml med destillerat vatten.

Referenser

1. Navarrete, g. Hudhistologi. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Finns på: Medigrafisk.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela eller.
3. Identifiering av Entamoeba histolytica/e. disparat För den färska amiba-tekniken kontra färgning med hematoxyin-eosin i akut diarré. Rev mex pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Finns på: Medigrafisk.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Användbarhet av histologiska tekniker för diagnos av infektion i anatomiska bitar. Rev Cub Med MIL, 2004; 33 (2). Finns på: Scielo.Sld
5. Panreac Applichem Itw Reegnts. Hematoxylin-eosinfärgning. 2017, Spanien. Finns på: itwreynts.com
6. "Eosina." Wikipedia, fri encyklopedi. 7 nov 2018, 08:18 UTC. 4: e 2019 är 22:13.Wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, fri encyklopedi. Maj 2019, 11:23 UTC. 4: e 2019, 22:48 Wikipedia.org