Agar Count Standard Foundation, förberedelser och användningar

han agarstandard Det är ett fast, icke -selektivt odlingsmedium, utformat för kvantifiering av den aeroba mikrobiella belastningen som finns i konsumentvatten, avloppsvatten, mejeridrycker, bland andra livsmedel. Detta medium är också känt som PCA -agar) för sin akronym i engelska plattantal agar. Det skapades 1953 av Buchbinder, Baris och Goldstein.

Standardkontomediet består av jästextrakt, triptein, glukos, agar och destillerat vatten. Denna formulering innehåller näringsmässiga grundelement som möjliggör utveckling av nutiden, FN -krävande aerob mikrobiell belastning.

Decimalutspädningar för UFC -räkningsräkningen. Källa: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenser/BY-SA/3.0)]

Eftersom mediet inte innehåller hämmare kan bakterier utvecklas utan några begränsningar, så det är idealiskt för de allmänna kolonierna räknas. Emellertid kommer plackkvantifieringstekniken inte att upptäcka alla de närvarande bakterierna, utan endast de som kan växa under de miljöförhållanden som agaren utsätts för.

I detta avseende bestäms vanligtvis plackkvantifieringstekniken av mängden aerob mesofilstypbakterier, det vill säga de som utvecklas i temperaturer mellan 25 och 40 ° C, med en optimal tillväxttemperatur vid 37 ° C.

Denna bakteriegrupp är mycket viktig, eftersom det finns mest patogena bakterier för människan.

Det bör noteras att intresse ibland kvantifierar mängden psykrofila bakterier som finns i maten. Dessa bakterier är de som utvecklas vid låga temperaturer (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

På samma sätt kan termofila bakterier, som utvecklas inom ett intervall mellan 50 ° C vid 80 ° C eller mer, vara viktigt i vissa typer av livsmedel som konserverade.

Mikrobiell kvantifiering uttrycks i kolonformande enheter (UFC) per gram eller provmilliliter.

[TOC]

Grund

Standardkontot är utformat för att möjliggöra en tillfredsställande utveckling av icke -märkande aeroba bakterier, eftersom jästextrakt, triptein och glukos ger nödvändiga näringsämnen för god mikrobiell utveckling.

Det kan tjäna dig: Alizarina: Egenskaper, förberedelser, användningar och toxicitet

Å andra sidan har mediet en lätt färg och ett transparent utseende, så det är idealiskt för visualisering av kolonier som utvecklats av den in -djupsökningsmetoden (platta spill).

Det är också möjligt kolonier som räknas med den ytplanterade metoden med Drigalski Spatula.

När den mikrobiella belastningen är hög måste decimala utspädningar av provet som studeras för att kunna utföra UFC -räkningen.

Det bör noteras att detta medium rekommenderas av American Public Health Association (APHA) för Aerobic Messophils Count.

Förberedelse

Väg 23,5 gr av det dehydratiserade mediet och upplöses i en liter destillerat vatten. För att helt upplösning bör blandningen värmas upp genom att vifta ofta tills den kokar. Följande steg beror på den planterade tekniken som kommer att användas.

För plåtdumpningstekniken

Distribuera genom att ge 12 till 15 ml i provrör. Steriliseras därefter i autoklav vid 121 ° C i 15 minuter. Låt stelna vertikalt i form av en taco. Spara tills det används.

Smälta taco när den kommer att användas. När du kan hålla den i Maria till 44-47 ° C medan proverna är beredda.

För ytsönd

Sterilisera mediet i autoklav vid 121 ° C och distribuera sedan 20 ml i petrisk sterila plattor. Låt stelna, investera och spara i kylen tills det används.

Temperera plattorna innan du använder. Medium pH måste vara 7,0 ± 0,2.

Använda sig av

Standardkontot används i den aeroba mesofila räkningstekniken under den mikrobiologiska analysen av vatten och mat. Kontot för den aeroba mesophilos är nödvändig, eftersom den bestämmer hälsokvaliteten på provet som studeras.

Tillämpningen av denna teknik (med hjälp av detta medium) möjliggör den makroskopiska visualiseringen av isolerade kolonier för kvantifiering.

Plattutladdningsteknik (sådd med djup)

-Procedur

Tekniken består av följande:

1) Homogenisera provet för att omfördela de närvarande bakterierna.

2) En initial suspension utförs i en steril flaska eller påse, vilket respekterar det 10 gr eller 10 ml förhållandet i 90 ml utspädningsmedel (10^-1).

Det kan tjäna dig: Ficology

3) Från den initiala suspensionen görs de relevanta decimalutspädningarna beroende på typ av prov. Ex: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Utspädningar utförs med Peptonada vatten- eller fosfatbuffertlösning.

För detta^-2 och så vidare.

4) 1 ml av varje utspädning tas och placeras på tomma sterila Petrie -plattor.

5) Tillsätt till varje platta 12 till 15 ml agar som tidigare smälts och vilade vid 44 - 47 ° C.

6) Ge mjuka roterande rörelser till plattorna för att fördela provet bredvid agar jämnt och låt stelna.

7) Investera plattorna och inkubera vid 37 ° C i aerobios i 24 till 48 timmar.

8) kulminerade tidens intäkter för att undersöka plattorna och räkna kolonierna i utspädningen som tillåter den. De plattor som har mellan 30 och 300 UFC väljs för kontot.

Räkningen kan göras manuell eller kan använda kolonivånare.

Värdena som tillåts av Ml av prov kan variera från ett land till ett annat enligt reglerna som de styrs.

-UFC -beräkning

Den allmänna beräkningen görs med följande formel:

Formel för den allmänna beräkningen av UFC -kvantifieringen. Källa: National Drug Administration and Medical Technology (ANMAT). Mikrobiologisk analys av mat, officiell analytisk metodik, indikatormikroorganismer. 2014 Volym 3. Finns på: Anmat.Gov.ar

Uttrycka resultaten i 1 eller 2 siffror, multiplicerar med lämplig bas 10. Exempel: Om resultatet är 16.545 är avrundad baserat på den tredje siffran vid 17.000 och kommer att uttryckas enligt följande: 1,7 x 10⁴. Nu, om resultatet var 16.436 är avrundad till 16.000 och uttrycker 1.6 x 10⁴.

Ytsådd teknik

-Procedur

-Ympas med 0,1 ml av det direkta provet om det är flytande, initial suspension 10^-1 eller av på varandra följande utspädningar 10^-2, 10^-3 etc, i mitten av en standardkonto.

Kan tjäna dig: Flora och fauna av Tamaulipas: Mer representativa arter

-Distribuera provet med Drigalski spatel eller glasstång i form av L. Låt stå i 10 minuter.

-Investera plattorna och inkubera i aerobios vid 37 ° C i 24 till 48 timmar.

-Fortsätt att räkna kolonierna, välj de plattor som ligger mellan 20 - 250 UFC.

-UFC -beräkning

För beräkningen appliceras utspädningsfaktorn, vilket är den omvända. Antalet till 2 betydande siffror avrundas (avrundas enligt den tredje siffran) och uttrycks i baseffekt 10. Till exempel om 224 UFC räknas i provet utan utspädning (10^-1), 22 x 10 rapporteras¹  UFC, men om siffran var 225 rapporteras den 23 x 10¹ Ufc.

Nu, om 199 UFC räknas i utspädning 10^-3, 20 x 10 kommer att rapporteras⁴ UFC, men om 153 UFC räknas i samma utspädning kommer att rapporteras 15 x 10⁴ Ufc.

QA

Standardkontomediet kan utvärderas med certifierade kända stammar, till exempel: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Om odlingsmediet är i optimala förhållanden förväntas tillfredsställande tillväxt i alla fall, med undantag av L. Fermentum som kan ha regelbunden prestanda.

För att utvärdera steriliteten hos odlingsmediet måste en eller två plattor av varje beredd parti (utan inokulering) vid 37 ° C i aerobios i 24 timmar inkuberas. Efter denna tid bör ingen tillväxt eller färgförändring av mediet observeras.

Begränsningar

-Smält inte agaren mer än en gång.

-Det beredda mediet kan pågå upp till 3 månader så länge det kvarstår i ett kylskåp och skyddas från ljus.

-Detta medium är inte lämpligt för att kräva mikroorganismer eller anaerober.

Referenser

1. National Administration of Medicines Food and Medical Technology (ANMAT). Mikrobiologisk analys av mat, officiell analytisk metodik, indikatormikroorganismer. 2014 Volym 3. Finns på: Anmat.Gov.ar
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, s.TILL. Tallriksgräns agar. 2009. Finns på: http: // f-soria.är
3. Condra pronadisa laboratorier. Agar för standardmetoder (PCA) enligt APHA och ISO 4833. Finns på: Condalab.com
4. Britania Laboratories. Agarplattantal. 2015. Finns på: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B och Velázquez eller. 2009. Tekniker för mikrobiologisk analys av livsmedel. 2: a upplagan. Kemi fakultet, UNAM. Mexiko. Finns på: depa.Fquim.Unk