Fosfatbuffert (PBS) Foundation, beredning och användning

han fosfatbuffert, BPS eller saltlösningsfosfatbuffert Det är en buffert och isotonisk lösning, vars funktion är att upprätthålla pH och osmotiskt tryck närmast den naturliga (fysiologiska) miljömiljön. Förkortningen PBS betyder fosfatbuffrad saltlösning.

PH och osmolaritet är två mycket viktiga aspekter som måste kontrolleras i vissa laboratorieprotokoll. När det gäller pH är det viktigt att det kontrolleras, särskilt i biokemiska reaktioner, eftersom dessa kan variera eller inte utföra om reaktanterna är i ett olämpligt pH.

Buffert Salino PBS -fosfat i två olika pH. Källa: Pixinio.com

Samtidigt är kontrollen av osmolaritet nödvändig, särskilt när man arbetar med levande celler, eftersom plasmamembranen i cellerna reagerar i enlighet med koncentrationen av lösta ämnen som de finns.

Om cellerna överförs till ett hypertoniskt medium kommer de att dehydrera, eftersom vattengradienten kommer att transporteras till sidan där det finns en större koncentration av lösta ämnen. Om cellerna tvärtom placeras i ett hypotoniskt medium kommer cellerna att absorbera vätska tills de ljuger.

Det är därför PBS -bufferten för laboratorieprotokoll som kräver cellunderhåll används In vitro, På detta sätt kommer cellerna inte att skadas.

PBS består av en kombination av salter, såsom natriumklorid, natriumfosfat, kaliumklorid och kaliumfosfat. PBS -sammansättning kan variera beroende på protokollet.

[TOC]

Grund

I grund och botten är funktionen av saltfosfatbuffert att upprätthålla ett konstant fysiologiskt pH bredvid en elektrolytisk koncentration som liknar den inuti organismen.

I denna miljö kan cellerna förbli stabila, eftersom de fysiologiska förhållandena simulerar så mycket som möjligt.

Till den ursprungliga PBS -formuleringen kan andra föreningar att vara nödvändiga läggas till, till exempel är tillägget av EDTA till bufferten användbar för tvätt av röda blodkroppar i tvärkompatibilitetstestet.

EDTA förhindrar fraktionen av komplementet C1 som finns i serumet, delas och lisar till de röda blodkropparna, det vill säga undvika falska resultat av inkompatibilitet. Dessutom hjälper EDTA att dissociera celler.

Kan tjäna dig: fylogenetiskt träd: typer och deras egenskaper, exempel

Förberedelse

Mängden salter som måste vägas för utarbetande av saltfosfat PBS beror på mängden som krävs för att förbereda:

-Lösning Lösningsbuffert Salino Phfosfat (PBS 10X)

För en liter lösning:

Väga:

80,6 g NaCl,

2,2 g KCL,

11,5 g NA₂Hpo₄,

2,0 g KH₂Hpo₄

Förberedelseteknik

I en bägerplats placera de tunga salterna, tillsätt tillräckligt med vatten (80%) och blanda på den omrörande plattan med magnetstång tills salterna upplöses.

PBS -beredning med agiterande järn med magnetstång . Källa: Användare: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filtrera för att ta bort oavsiktliga partiklar. Använd filter med 0,45 um porer. Autoklav sterilice och distribuerar aseptiskt i laminär flödesklocka i glasburkar med lock.

Till 10x -lösningen (koncentrerad) justerar inte pH. Justeringen görs en gång utspädd till buffert PBS 1x -koncentrationen, (utspädning 1:10).

-Saltfosfatbuffert (PBS 1X)

PBS 1X kan framställas direkt, väga motsvarande mängder av varje salt eller kan framställa utspädning av moderlösningen (1:10) med sterilt destillerat vatten.

-För att direkt förbereda en liter saltfosfat PBS 1x ånger:

8,06 g NaCl,

0,22 g KCl,

1,15 g NA₂Hpo₄,

0,20 g KH₂Hpo₄

Förberedelseteknik

Fortsätt som förklarats i den koncentrerade lösningen. Därefter måste pH justeras. För att göra detta, mäta pH och beroende på resultatet Använd syra (HCl) eller bas (NaOH) för att sänka eller ladda upp pH -pH vid behov tills det är 7.4.

Syran eller basen tillsätts droppe för droppe under övervakning av pH-värdet på lösningen med hjälp av en pH-meter. Filter, autoklav sterilice och distribuerar aseptiskt i koniska rör eller flaskor vid behov.

-För att förbereda PBS 1X från 10x Mother Solution:

Gör en utspädning 1:10. För att framställa 1 liter PBS 1x, mät 100 ml av moderlösningen och tillsätt 700 ml sterilt destillerat vatten. Justera pH och slutför mängden vatten tills den når 1000 ml.

Kan tjäna dig: Riktningsval: Vad är, definition, exempel

Den beredda PBS -bufferten är färglös och transparent.

Daglig användning PBS kan förvaras vid rumstemperatur och resten i kylen.

.Lösningar för pH -inställning

Hcl

För 100 ml HCl (saltsyra) till 1 molar.

Mät 91 ml destillerat vatten och placera det i ett fällfartyg med 250 ml kapacitet.

Mät 8,62 ml koncentrerad HCl och tillsätt den långsamt till bägaren som innehåller vattnet (gör det aldrig upp och ner). Ta relevanta biosäkerhetsåtgärder när man hanterar starka syror (mycket frätande substans).

Blanda i 5 minuter med en omrörningsplatta med en magnetisk stång inuti glaset. Gå till en 100 ml boll och spola vid 100 ml med h₂Eller destillerad.

Naoh

För 100 ml NaOH (natriumhydroxid) 10 molar.

Mät 40 ml destillerat vatten och placera det i en 250 ml kapacitetsbägare. Mät 40 gr naoh och tillsätt i vattnet. Blanda med en omrörningsplatta med en magnetisk stång inuti glaset.

Gå till en 100 ml aggroid boll och spolning med destillerat vatten. Följ biosäkerhetsstandarder, eftersom denna reaktion är exoterm (släpper energi i form av värme).

Om du vill förbereda andra mängder saltfosfatlösning kan du konsultera följande tabell:

Källa: "Viral and Human Genomics Laboratory, UASLP School of Medicine"

Ansökningar

Huvudsakligen används det i cellbiologiska laboratorier, immunologi, immunohistokemi, bakteriologi, virologi och forskning.

Det är idealiskt att göra cellulär tvätt med centrifugat (röda blodkroppar), cellmonokapas tvättade, i spektroskopiska ellipsometri -tekniker, i kvantifiering av bakteriella biofilmer, i upprätthållandet av cellgrödor för virus, som en lösning av tvätt i tekniken för indirekt Immunofluorescens och i tekniker för karakterisering av monoklonala antikroppar.

Det tjänar också till att transportera celler eller vävnader, som utspädningsmedel för celler som räknas, framställningen av cellenzymer (tripsin), som ett utspädningsmedel för biomolekylernas uttorkningsmetod och att framställa andra reagens.

Kan tjäna dig: heterotrof näring: egenskaper, steg, typer, exempel

Å andra sidan visade Martin och kollaboratörer 2006 att PBS är användbart i kriminaltekniska laboratorier, särskilt i återhämtningen av spermier från vaginal smet, eller i återhämtningen av penilsmetning vaginal celler. På detta sätt kan det fastställas om det har förekommit en sexuell relation.

Begränsningar

-Vissa PBS -buffert ger som konserveringsmedel ett ämne som kallas natrium azid. Denna förening kan generera explosiva ämnen om den kommer i kontakt med bly eller koppar. Av denna anledning måste särskild försiktighet vidtas vid kassering av detta reagens för dräneringen. Om det kasseras av denna rutt måste rikligt vatten tillsättas för att utspädas till det maximala.

-Fosfatbufferten bör inte läggas till zink, eftersom den fäller ut vissa salter.

-Wangen och kollaboratörer fastställde 2018 att användningen av PBS inte var lämplig för tvätt av primär akut myeloid leukemi (AML) extraherad från perifert blod, eftersom många celler går förlorade genom lysering, med en stor minskning av proteinmaterialet.

Därför bestämde de sig för att AML -primära celler inte skulle tvättas med PBS efter lagring i flytande kväve.

Referenser

1. Coll j. (1993). Diagnostiska tekniker i virologi. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Cell kultur. Byte av medium. Institutionen för normal och patologisk histologi University of Sevilla. Finns i personal.oss.är
3. Fosfatbuffrad saltlösning (PBS). (2008). Standard operativa procedurer (SOP) Virala och mänskliga genomik Laboratoriefakultet för medicin UASLP. Finns på: Genomics.Uaslp.mx
4. "Saltfosfatbuff." Wikipedia, fri encyklopedi. Apr 2019, 19:36 UTC. Apr 2019, 02:57 är.Wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, von-bilderling C.Ämnen i molekylär biofysik. Finns på: Användare.Df.Uba.ar
6. Redigera. Manuell. PBS+EDTA. Finns på: felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Användningen av fosfatbuffrad saltlösning för återhämtning av celler och spermatozoer från vattpinnar. SCI Justice. 2006; 46 (3): 179-84. Finns i: NCBI.Nlm.Nih.Gov
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, et al. Konserveringsmetod och fosfatbuffrad saltlösning Apfect Akut myeloid leukemi -proteom. Int J Mol Sci. 2018; 19 (1): 296. Finns i: NCBI.Nlm.Nih.Gov
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Teoretiska och praktiska grunder för histokemi. Superior Council of Scientific Investigations. Madrid. Finns på: böcker.Google.co.gå