Hälften av grunden, förberedelserna, användningen och begränsningarna

han Hälften av eller glukosfermentering är en halvfast agar speciellt utformad för att studera oxidativ och fermentativ metabolism av kolhydrater i en viktig grupp av mikroorganismer som skiljer sig från enterobakterier, kallad icke-enterériska negativa bacilli.

Det skapades av Hugh och Leifson; Dessa forskare insåg att konventionella medier för studier av syraproduktion från kolhydrater inte var lämpliga för denna specifika grupp av bakterier.

TILL. Mitt i basal reklam. B. Rör med hälften av sådd. Källa: A- och B -foton tagna av författaren MSC. Marielsa Gil.

Detta beror på att icke -enteriska negativa baciller vanligtvis producerar låga mängder syror, till skillnad från enterobakterier.

I detta avseende har mediet med speciella egenskaper som kan upptäcka de små mängderna av syra, både genom oxidativ och fermentativ. Dessa skillnader är relaterade till mängden peptoner, kolhydrater och agar.

Detta medium innehåller mindre peptonas och större koncentration av kolhydrater, på detta sätt ökas produkterna som alkohyler med mediet till följd av proteinernas metabolism och produktionen av syror ökas genom användning av kolhydrater.

Å andra sidan gynnar minskningen av mängden agar spridningen av syran som produceras av hela mediet, förutom att observera rörlighet.

Mediet är sammansatt av pepton, natriumklorid, bromotimolblått, dipotassiumfosfat, agar och ett kolhydrat. Det vanligaste kolhydratet är glukos men andra kan användas enligt den du vill studera, såsom laktos, maltos, xylos, bland andra.

[TOC]

Grund

Liksom alla kulturmedel måste miljön innehålla näringsmässiga ämnen som garanterar bakterietillväxt; Dessa ämnen är peptoner.

För sin del tillhandahåller kolhydrat energi och tjänar samtidigt till att studera mikroorganismens beteende mot den, det vill säga det gör det möjligt att klassificera bakterierna som en oxidativ, fermentativ eller icke -sjalism.

Mediet för innehåller ett pepton/kolhydratförhållande på 1: 5 till skillnad från konventionella medier på 2: 1. Detta garanterar att mängden alkaliska aminer som bildas av nedbrytningen av peptoner inte neutraliserar bildningen av svaga syror.

Kan tjäna dig: sfingomyeline: vad är, struktur, funktioner, syntes

Å andra sidan innehåller mediet natriumklorid och dipotassiumfosfat. Dessa föreningar stabiliseras osmotiskt i mitten och reglerar pH. Bromootimol Blue är pH -indikatorn, som gör färgen på den gula gröna med produktion av syra.

Vissa mikroorganismer kan använda kolhydrater genom oxidativ eller genom den fermentativa vägen, medan andra inte tar något sätt.

Detta beror på kännetecknet för varje mikroorganism. Till exempel kan vissa strikta aeroba mikroorganismer oxidera vissa kolhydrater, och valfria anaerober kan oxidera och jäsas beroende på miljön som omger dem, medan andra inte oxiderar eller jäsar kolhydrater (ascarolitics).

Slutligen finns det en modifiering av mediet som rekommenderas av CDC som innehåller en speciell bas av med röd fenol som indikator.

Oxidationsprocess

Glukosoxidationsprocessen kräver inte glukosfosforylering, som inträffar i fermenteringsprocessen. I detta fall oxideras aldehydgruppen till en karboxylgrupp, vilket resulterar i glukonsyra. Detta i sin tur oxideras till 2-zo-glykonic.

De senare eller två pyruvinsyramolekylerna ackumuleras eller försämras. Detta system behöver närvaron av syre eller en oorganisk förening som en slutlig elektronacceptor.

Produktionen av syror vid denna rutt är svagare än den som erhålls av den fermentativa vägen.

Jäsningsprocess

För att göra glukosfermentering av någon av de tillgängliga vägarna måste den först fosforyleras, bli glukos-6-fosfat.

Glukosfermentering kan ta flera vägar, den viktigaste är vägen för Embden-meyerhof-parna för nedbrytningen av pentos.

Den valda vägen beror på det enzymatiska systemet som har mikroorganismen.

Via de Embden-Meyerhof-Parna

I jäsningen av glukos av Embden-meyerhof-parna. Därifrån har ett mellanhandsämnet sitt ursprung, vilket är pyruvinsyra.

Kan tjäna dig: fotoperiod

Därifrån bildas olika typer av blandade syror som kan variera från en art till en annan.

Detta system förekommer i frånvaro av syre och behöver en organisk förening som en slutlig elektronacceptor.

Encoudoroff -rutt

I jäsningen av glukos med Intner-Doucoroff-vägen går glukos 6-fosfat till glukon-ᵼ-lakton-6-fosfat och därifrån är det oxiderat till 6-fosfogluvat och 2-ZO-3-DEDEXI-6 fosfoglukonat, för att äntligen bilda pyruvinsyra. Detta via behöver syre så att det finns glykolys.

Väg för nedbrytning av Pentose eller Warburg-Dikens monofosfatmonofosfat via

Denna rutt är en hybrid från de föregående 2. Det börjar liknar Entner-Woudoroff-vägen, men därefter bildas glyceraldehyd-3-fosfat som en pyruvinsyrasyror, som är fallet i vägen för Embden-Meyerhof-parna.

Förberedelse

Väga:

2 gr av pepton

5 gr natriumklorid

10 gr av d-glucosa (eller kolhydrat som kommer att beredas)

0,03 gr bromotimolblått

3 gr av agar

0,30 gr dipotasisk fosfat

1 liter destillerat vatten.

Blanda alla föreningar utom kolhydrat och upplös i 1 liter destillerat vatten. Värme och rör om tills den löses i sin helhet.

Vid kylning vid 50 ° C tillsätts 100 ml glukos till 10% (filtrerad).

Aseptiskt distribuera 5 ml av mediet i provrör med bomullslock och autoklavat vid 121 ° C, 15 pund tryck under 15 minuter.

Släpp i vertikalt läge.

Medium pH måste vara 7, 1. Färgen på det beredda mediet är grön.

Hålla i kylen.

Ansökningar

Mediet är ett speciellt sätt att bestämma metaboliskt beteende hos en mikroorganism mot ett kolhydrat. Särskilt för dem som bildar syror av ett knappt, svagt eller noll sätt.

Såtas

För varje mikroorganism, 2 rör av behövs, måste båda ympas med mikroorganismen för att studera. Kolonin tas med ett rakt handtag och en punktering görs i mitten av röret utan att nå botten; Du kan göra flera punkteringar, så länge du inte är intresserad av att observera rörlighet.

Kan tjäna dig: alanin: egenskaper, struktur, funktioner, biosyntes

Till ett av rören tillsätts ett lager av steril vätskelinje eller sterilt smält paraffin (ungefär 1 till 2 ml) och är märkt med bokstaven "F". Det andra röret lämnas original och märkt med bokstaven "O". Båda rören inkuberas vid 35 ° C och observeras dagligen upp till 3 till 4 dagar.

Tolkning

Gasmetabolism och produktion

Tabell: Klassificering av mikroorganismer enligt deras beteende i det öppna (oxidativa) och stängda (fermentativa) rören (fermentativ)

Källa: Tillverkad av MSC -författaren. Marielsa Gil

Gasen observeras med bildandet av bubblor eller förskjutning av agar.

Det bör noteras att en organisme som bara oxiderar glukos men inte jäsning, inte kan jäsa andra kolhydrater, i alla fall kommer den bara att oxidera den. Därför kommer det förseglade röret i denna situation att utelämnas för att studera andra kolhydrater.

Rörlighet

Dessutom kan mitt i rörligheten ses.

Positiv rörlighet: Tillväxt som inte är begränsad till inokuleringszonen. Det finns tillväxt mot rörets sidor.

Negativ rörlighet: Tillväxt endast i den första inokulum.

QA

När kvalitetskontroller kan du använda följande stammar: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa och Moraxella SP. De förväntade resultaten är:

1. coli: Glukosfermenter (både gula och gasrör).
2. aeruginosa: Glukosoxidader (gult öppet rör och grön eller blå tätning).
3. Moraxella SP: Icke -borttagning (grönt eller blått öppet rör, grönt tätningsrör).

Begränsningar

-Vissa mikroorganismer kan inte växa i miljön. I dessa fall upprepas testet men till mediet 2% serum eller 0,1% av jästextraktet.

-Oxidationsreaktioner observeras ofta nära ytan och resten av mediet kan vara grönt, på samma sätt som det tas som positivt.

Referenser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 ed. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av klinisk betydelse bakterier. 3: e upplagan. Pan -amerikansk redaktion. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratorier Francisco Soria Melguizo. 2009. Av glukosmedium. Finns på: http: // f-soria.är
5. Condra pronadisa laboratorier. Mitt i glukos. Finns på: Condalab.com
6. BD Laboratories. 2007. Av basmedium. Finns på: BD.com