Kulturmedium, funktion, typer, förberedelser

De kulturmedia De är speciella näringsberedningar för återhämtning, isolering och underhåll av bakterie- och svampmikroorganismer. Dessa media kan vara solida, flytande eller halvsolid.

Louis Pasteur var den första som visade att i en buljong gjord med bitar av kokt kött tjänade den så att bakterierna återges i stor mängd, så att du fördunvar buljongen. I detta avseende anses pasteur köttbuljong som det första flytande odlingsmediet som används.

Oförberedda kulturmedier (fasta ämnen och vätskor). Källa: Flickr

Då gjorde Robert Koch, tack vare hjälp av hans kollaboratörer Julius Richard Petri och Walter Hesse, stora framsteg. Den första designade Petri Plate, som fortfarande används idag; Och den andra inträffade honom för att ersätta gelatinet för agar-vatten för att förbereda den fasta kulturmediet, vilket var mycket relevant, eftersom gelén försämrades av vissa mikroorganismer.

För närvarande finns det många typer av kulturmedier för olika ändamål, därför klassificeras dessa enligt deras funktion: bland de viktigaste, medel för näringsodling, selektiv, differentiell, transport, anrikning, räkning av räkning, kolonier, underhåll och underhåll och underhåll för bevis på mottaglighet.

Vissa kulturmedier är speciella för att observera kemiska reaktioner, som är mycket användbara för att identifiera den involverade mikroorganismen. Bland dem kan de nämnas: medium Kigler, Mio, Lia, Citrate, bland andra.

[TOC]

Historia

Det första odlingsmediet framställdes av Louis Pasteur när han försökte.

Han förberedde en buljong med bitar av kött och observerade att efter några dagar efter att ha blivit utsatt för luften blev han skumma och i buljongen fanns det en märkbar mängd mikroorganismer. Samtidigt förblev en annan buljong med köttbitar som tidigare kokats och hermetiskt stängda genomskinliga när dagarna gick under dagarna.

Detta fick många forskares uppmärksamhet och insåg att dessa mikroorganismer var ansvariga för att sönderdela kött och förutom att producera vissa sjukdomar.

Av denna anledning var det viktigt att skapa ett sätt att reproducera dessa mikroorganismer i laboratoriet för att studera dem mer grundligt.

I detta avseende gav Robert Koch ett ovärderligt bidrag i förbättringen av vissa laboratorietekniker, särskilt de som är relaterade till bakteriell isolering, när han introducerade begreppet fast kulturmedium.

Först använde han potatisskivor som ett fast medium men tillsatte sedan gelatin till köttbuljongerna med bättre resultat. Det fanns emellertid tillfällen då gelén smälte och blev en flytande gröda. Idag är det känt att detta händer eftersom vissa bakterier kan hydrolysera gelatinet.

Det var då idén att använda Agar-Adding, en förening som hans fru brukade förtjockna hans godis inträffade för en av hans kollaboratörer.

Detta medium av rudimentär kultur har gradvis sofistikerat, tills den når kulturmediet som är kända idag.

Sammansättning

Varje medium har en annan sammansättning, men det är viktigt att det innehåller de specifika näringsämnena för en bra utveckling av den typ av mikroorganism som söks.

Det kan också innehålla specifika kemikalier som hjälper till att avslöja den metaboliska vägen som har en viss belastning, eller som bevisar närvaron av vissa enzymer.

Ett annat viktigt element är användningen av stötdämpare ämnen. Dessa hjälper till att upprätthålla den osmotiska balansen i media såväl som pH.

De kan också innehålla kolhydrater och en pH -indikator för att visa jäsningen av tillsatt socker. En färgförändring kommer att observeras om det finns försurning som genereras genom jäsning.

Vissa kulturmedier innehåller hämmare ämnen. Beroende på det använda ämnet kommer tillväxten av mikroorganismer att begränsas och andras kommer att gynnas.

Typer av kulturmedier

Odlingsmedier klassificeras enligt olika kriterier. Dessa är: Enligt deras konsistens, deras sammansättning och deras funktion.

- Enligt din konsistens

Vätskor

De innehåller inte agar -ago. Bakteriell eller svamptillväxt bevisas av buljongens grumlighet, vilket ursprungligen är genomskinligt.

Fasta ämnen

De innehåller mellan 1,5 till 2% agar -Agar. Den stelnade blandningen har en yta som motstår den fina förskjutningen av platinahandtaget, utan att den bryts.

Halvfast

De innehåller ungefär 0,5% av agar -agar, därför är det ett mellanliggande tillstånd mellan vätskan och det fasta ämnet. Perfekt i media som tjänar till att se rörlighet. De rekommenderas också för bevarande av stammar, eftersom de håller fukten länge.

Kan tjäna dig: saltacionism: egenskaper, bevis och exempel

Bifasik

De är medel som är beredda på ett sådant sätt att det finns en solid fas och på detta ett flytande medium. Används allmänt för blodkulturer.

- Enligt dess sammansättning

Naturkulturmedia

De är ämnen tagna direkt från naturen för att odla bakterier, vilket ger dem en miljö närmast hur de utvecklas i ekosystemet normalt. Exempel, mjölk, juice, utspädd blod, serum, etc.

Syntetkulturmedium

De är de mest använda idag, de är de dehydratiserade medlen som vi förvärvar i kommersiella hus och som deras kemiska sammansättning är känd, eftersom de har utformats strategiskt enligt vilken typ av mikroorganism som söks isolera isolera.

Semi -styntetiska kulturmedier

Det är kombinationen av ett syntetiskt medium till vilket ett naturligt element tillsätts för att berika mediet.

Cellulära kulturmedier

De är speciella medel för viruodling, som dessa mikroorganismer inte kan överleva utanför celler, de måste innehålla vävnad eller levande celler, från ett djur eller en växt.

Exempel: Cellulära apa njurgrödor eller embryonala ägg.

- Enligt dess användbarhet

Näringsrika, selektiva, differentiella, transport, anrikning, identifiering, kvantifiering av kolonier, underhåll och känslighetstester. Kommer att beskrivas senare.

Fungera

Oavsett typ av odlingsmedium har alla något gemensamt och är att de underlättar eller främjar reproduktionen av vissa mikroorganismer. Skillnaden ligger i sammansättningen av var och en av dem, vilket är en avgörande faktor för det slutliga verktyget de kommer att ha.

Var och en av de befintliga kulturmedierna är strategiskt utformade för den specifika funktion som den skapades, det vill säga alla har en grund som styr riktlinjerna för deras specifika funktion.

Det bör noteras att kulturmediet en gång sådd måste genomgå temperatur och syreförhållanden som är lämpliga för den typ av bakterier eller svamp som du vill isolera.

Om du till exempel vill isolera mesofil anaeroba bakterier, blodagar och inkubera under anaerobiosbetingelser (utan syre) vid 37 ° C under 48 timmar under 48 timmar under 48 timmar.

Nu, om en svamp behövs för att isolera, används Sabouraud -agar med antibiotika. Det inkuberas i aerobios, vid rumstemperatur i flera dagar, eftersom den senare är långsam tillväxt.

Enkel näringsrik kulturmedia

Som namnet antyder innehåller dessa kulturmedier näringsmässiga ämnen, såsom vitamin, aminosyror, kväve och kolkällor, bland dem kan de nämnas: köttekstrakt eller jästextrakt, majsstärkelse, bukspottkörtel digererad, peptoner, glukos, bland andra.

De innehåller också andra komponenter som ger en osmotisk balans i miljön, eftersom de flesta grödor kräver ett pH nära 7,0. Dessa element kan vara: bland annat natriumklorid, dinatriumfosfat.

Utspädningsmedel är destillerat vatten och fasta medier har agar-add.

Syftet med dessa kulturer är att återvinna den bakteriella eller svampmikrobiota som finns i ett visst prov. Det diskriminerar inte mellan mikroorganismer, eftersom det kan växa ett stort antal bakterier, både Gram -positiva och gram negativa, liksom jäst och myceliala svampar.

De rekommenderas att så prover som kommer från normalt sterila platser. De tjänar emellertid inte för att kräva mikroorganismer.

De är också användbara för underhåll av stammar, så länge de inte innehåller glukos.

Berikande kulturmedia

Om blod eller uppvärmt blod till enkla näringsmedier tillsätts, blir de berikade media (blod respektive chokladagar).

Dessa medel är mycket användbara för att så prover som normalt är sterila, för att rädda stammar som är svaga och för att isolera krävande mikroorganismer från näringssynpunkt.

Selektiv kulturmedium

Selektiva odlingsmedier, förutom att innehålla viktiga näringsämnen för tillväxt av vissa mikroorganismer av intresse, läggs också till hämmande ämnen, såsom antibiotika, antifungmedel, färgämnen, gallsalter, bland andra.

Inhibitorämnen är avsedda att minska de olika stammar som kan växa, vilket gynnar tillväxten av en särskilt speciell grupp som vill rädda.

Exempel: EC -buljong (special för totala och fekala coliforms) eller Sabouraud -agar med antibiotika (specifik för svampar).

Differentiell kulturmedia

Differentialmedier innehåller näringselement som är nödvändiga för tillväxten av en specifik grupp av mikroorganismer och innehåller också ämnen som i närvaro av vissa mikroorganismer kommer att metaboliseras eller försämras.

Det vill säga de kommer att producera kemiska reaktioner som på ett eller annat sätt kommer att bevisas i odlingsmediet.

Det kan tjäna dig: fotisk zon: egenskaper, flora ljus, fauna

Vissa reaktioner alkaliska eller försurar mediet och tack vare närvaron av en pH -indikator kan dessa förändringar bevisas genom en färgad vändning i mitten och kolonin.

Därför bland en stor grupp bakterier som kan växa i det mediet, de som metaboliserar eller försämrar ämnet och de som inte gör det, helt enkelt observera färgen på kolonin och mediet.

Till exempel tillåter blodagar att skilja bakterier som producerar beta -hemolys (transparent gloria) från de som producerar alfa -hemolys (grönhalo) och från de som inte producerar hemolys.

Selektiva och differentiella medier

Ett exempel på detta är vad som händer i MacConkey Agar. Det är selektivt eftersom det bara tillåter tillväxten av Gram -negativa baciller; Och det är differentiellt, eftersom det kan skilja de jäsande bakterierna i laktos (fuchsia färgkolonier) av icke -fermentering (blek eller färglös rosa färg).

Transportkulturmedia

Som namnet antyder är de medel som används för att transportera prover som har tagits på en mer eller mindre avlägsen plats till laboratoriet som kommer att bearbeta provet. Transportmedel behåller provet under de bästa förhållandena för tillförlitliga resultat.

Dessa kulturmedier har mycket speciella egenskaper, eftersom de inte kan överskrida näringsämnen, eftersom den som finns på bakteriepopulationen förblir livskraftig, men utan att öka antalet.

De är vanligtvis halvtolidmedia, vilket gör att provet kan hydratiseras. Det bör emellertid inte vara spridd för att skicka provet så snart som möjligt till laboratoriet. Exempel på transportmedel: Medio Stuart, Cary Blair och Amies.

Hälften och anrikningskultur

Dessa kulturmedier är flytande. De används för att rädda specifika patogener som vid varje given tid kan finnas i ett minimumkvantitetsprov.

Det är också användbart att rädda en patogen stam som kan vara svag på grund av någon tidigare behandling som mottagits. T.ex.: Peptonada vatten, tioglykolatbuljong och selenito buljong.

Dessa medel har hämmande ämnen som undviker tillväxten av den medföljande mikrobiota och specifika näringsämnen som gynnar utvecklingen av mikroorganismen av intresse.

Odlingsmedium för identifieringsändamål 

Dessa media har ämnen som kan metaboliseras kemiskt av vissa bakterier, vilket producerar kemiska reaktioner som visar närvaron av specifika enzymer eller metaboliska vägar.

Därför används de som biokemiska test som hjälper erkännande av genren och arten i en viss grupp av stammar. Ex: Medium Kigler bevisar om mikroorganismen kan jäsa glukos och laktos, om den producerar väte och gassulfid.

Detta medium innehåller avslöjande ämnen som tillåter att observera reaktionen, såsom pH -indikatorn och järnjoner.

Detta enkla test kan differentiera två stora grupper av bakteriella mikroorganismer, såsom bakterier som tillhör Enterobacteriaceae -bakteriefamiljen som kallas icke -fermenting.

Medel att räkna kolonier

Dessa är enkla, icke -selektiva medel som tjänar för kvantifiering av en mikrobiell population, till exempel standardkontot. Den typ av mikroorganism som kommer att växa i detta medium beror på temperaturen och syreförhållandena som är etablerade.

Odlingsmedium för känslighetsbevis

Det standardiserade mediet för detta ändamål är Müeller Hinton -agar, detta betyder att det är idealiskt att utvärdera beteendet hos olika antibiotika mot en isolerad patogen mikroorganism.

Det är särskilt användbart i små krävande bakterier, medan det i krävande bakterier bara kan användas om detta kompletteras med blod.

Underhållsmedel för underhåll

Dessa medel är avsedda att reproducera mikroorganismen och också upprätthålla en längre möjlig livskraft hos bakterien eller svampen och att deras fysiologiska funktioner bevaras.

En viktig egenskap är att denna typ av medium inte bör innehålla glukos, eftersom även om det är ett element som ger snabb tillväxt, producerar dess jäsning syror som minskar mikroorganismens livslängd.

Vissa laboratorier måste hålla vissa mikroorganismer som är livskraftiga för att användas därefter i forskningsstudier, interna kontroller eller för undervisningsändamål.

Förberedelse

Det finns för närvarande många varumärken som distribuerar de olika kulturmedierna. Media kommer i en lyofiliserad eller dehydratiserad form, som finns i hermetiska och skyddade ljusburkar.

Varje medium ger en etikett som anger namnet på mediet, dess komponenter, partiantal och hur mycket man ska väga för att förbereda en liter kulturmedium.

Kan tjäna dig: prebiotisk evolution: var det hände och vad som är nödvändigt

Som utspädningsmedel används destillerat vatten. Den tunga mängden upplöses i en liter destillerat vatten tills blandningen är homogeniserad. De flesta media tas till autoklaven, 15 pund, 121 ° C temperatur, under 15 minuter.

Liquid Media är redan distribuerade i sina respektive arbetsrör, medan den solida media autoklavat i Erlenmeyer -kolvar.

Det senare låter stå tills de når en temperatur på 55 ° C och serveras i Petris plattor i en laminär flödesklocka eller nära Bunsen -tändaren. De får stelna och är inverterade i kylskåp.

Det finns också solida kulturmedier som är distribuerade i rör, vilket gör att de kan stelna antingen i tacos (rak) eller flöjtopp (lutande).

Innan du använder något förberett odlingsmedium, vare sig det är fast eller vätska, måste det härdas innan provet så.

Betydelse

Kulturmediet är utan tvekan ett mycket värdefullt arbetsverktyg för mikrobiologer, eftersom de möjliggör återhämtning av det infektiösa agentet som vid en viss tid kan påverka en individ eller förorenar en mat, en miljö eller en yta.

I detta avseende kan man säga att mikrobiologi har olika områden, bland dem är kliniska, industriella, miljömässiga, livsmedelsmikrobiologi, bland andra och i alla kulturmedel används.

Naturligtvis kan den typ av medium som används i båda fallen variera beroende på behov och typ av bearbetat prov. Gruppen av mikroorganism som sökte påverkan också.

Isoleringen av den patogena mikroorganismen eller orsakar föroreningar är nödvändig för att kunna placera en effektiv behandling eller anta procedurer som hjälper till att eliminera föroreningen i fråga.

När det gäller klinisk mikrobiologi är det inte bara viktigt.

Denna studie som också använder ett odlingsmedium gör det möjligt att säga vilken antimikrobiell som är känslig och vilken som är resistent eller i ett nötskal, som kan användas som en behandling och som inte gör det.

Därför kan odlingsmedier inte saknas i ett mikrobiologilaboratorium, oavsett område.

Slutligen kan det sägas att kulturmedier har gjort det möjligt för oss att undersöka olika aspekter, både bakterier och svampar.

Kvalitetskontroll av odlingsmedier

Förberedelserna och användningen av kulturmedia bör inte göras lätt. I varje laboratorium måste det finnas en lägenhet som tillämpar kvalitetskontrollprotokoll på media, varje gång nya partier är förberedda, och därmed garanterar att de är ordentligt förberedda, sterila och funktionella.

För att utvärdera deras sterilitet tas och inkuberas ett eller två medel för varje parti vid 37 ° C under flera dagar (det bör inte bli någon tillväxt). För att kontrollera dess funktion används ATCC -referensstammar (American Type Culture Collection) vederbörligen odlade och livskraftiga.

Odling media bortskaffande

Efter att ha använt kulturmediet måste de kasseras på ett sådant sätt att det inte förorenar miljön.

För att göra detta steriliseras materialet i autoklav innan det kasseras. Därefter avlägsnas glasartikatet. Det senare blir tvättat, torkat, steriliserat och sparat för senare användning. Vid användning av engångsplattor steriliseras dessa och kasseras därefter i speciella väskor.

Referenser

1. Borrego mikrobiologi i frimärken VIII. Robert Koch: Triumph of Perseverance (i). SEM 2018, 117 (1): 1-18 University of Malaga. Finns på: dagar.Uab.Katt/
2. Volcy C. Genesis och utveckling av Kochs postulat och deras relation till fytopatologi. En recension Kolomb. 2008; 26 (1): 107-15. Finns på: Scielo.org.co/
3. Burguet Lago Nancy, Castillo Abraham Lourdes. Kvalitetskontroll av kulturmediet som används vid miljöövervakning av klassificerade produktionsområden. Kubansk rev hig epidemiol 2013; 51 (2): 155-160. Finns på: Scielo.
4. Bonilla M, Pajares S, Vigueras J, Sigala J, Le Borgne S. Didaktiskt materialhandbok för grundläggande mikrobiologi -metoder. Metropolitan Autonomous University. Naturvetenskap och teknikavdelning. Cuajimalpa -enhet. 2016. Finns på: CUA.Uam.MX/
5. Carbajal a. Cellular Culture Media: En recension. Labome laboratoriernas värld. University of Pittsburgh Medical Center, USA. 2013 tillgänglig på: es/
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 ed. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.