Coagulase Test Foundation, procedur och användning

De Koagulastest Det är en laboratorieteknik som används för att lyfta fram närvaron av koagulasenzymet. Detta enzym har egenskapen koagulär plasma. Loeb 1903 var den första som beskrev detta enzym.

Detta test utförs för att gram positiva kokosnötter, positivt katalas, vilket möjliggör stammar av Staphylococcus aureus av resten av stafylokocken, eftersom han är den enda mikroorganismen av klinisk betydelse som producerar den.

Båda bilderna avslöjar ett positivt koagulastest. Källa: Vänster bild: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http: // Creativecommons.Org/licenser/BY-SA/3.0/]]. Rätt bild: Foto taget av författaren MSC. Marielsa Gil.

I detta avseende kallas ofta medlemmarna i Staphylococaee -familjen som ger detta negativa test Staphylococcus koagulas negativt.

Det finns några stammar som skiljer sig från S. aureus  som kan producera koagulas, till exempel Staphylococcus schleiferi spp coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius och s. Delphini.

De första tre är emellertid av klinisk betydelse på veterinärnivå och kan sällan hittas som ett kausalt medel för mänskliga infektioner, medan S. Delphini Det finns endast i marina miljöer.

Dessutom skiljer de sig lätt för S. Hyicus och S. Intermedius De jäsar inte mannitolen och S. Schleiferi spp coagulans jäsar inte maltosen, inte heller trehalosa, medan S. aureus Ja jäsa dessa kolhydrater.

Närvaron av koagulasenzymet har kopplats till stammens virulens.  Emellertid har denna teori fallit med tanke på att andra virulenta negativa koagulasarter observeras kapabla att producera viktiga infektioner.

[TOC]

Grund

Staphylococcus aureus Det producerar två typer av koagulas, ett som förblir kopplat till cellväggen, även kallad en agglutinationsfaktor eller en reaktiv faktor av koagulas (FRC) och en extracellulär som frigörs i flytande grödor. Det är därför de kallas United Coagulase respektive gratis koagulas.

Koagulasenzymet är skyldigt sitt namn till den handling det producerar. Detta har förmågan att omvandla fibrinogen till fibrin, vilket skapar en uppenbar koagel när den är i plasma, det vill säga detta enzym simulerar trombinaktiviteten hos koaguleringsvattenfallet.

I själva verket är en av de mest accepterade teorierna att United Coagulase reagerar med fritt koagulas för att aktivera koagulationsfaktorer. Denna aktivering genererar ett ämne som verkar som liknar hur protrombin gör och skapar en förening med trombinfunktion.

Kan tjäna dig: sköldkörtelprofil: hormonfunktion, betydelse, kvantifiering

Skillnaden med det normala koaguleringsvattenfallet är att denna reaktion inte behöver närvaron av kalcium och inte påverkas av heparin.

För att utföra koagulastestet räcker det för att möta en färsk Staphylococcus -gröda med en helst kaninplasma och därmed observera formationen eller inte av koagelen.

Det finns specifika tekniker för att upptäcka United Coagulase och United och Free Coagulase samtidigt.

Några påslag av S. aureus De ger ett snabbare positivt resultat än andra. Hastigheten för koagelbildning är direkt proportionell mot den nuvarande koagulaskoncentrationen.

Tekniken för koagulastestet i bilden upptäcker United Coagulas.

Procedur

-Koagulastest hos innehavare

Materiel

-Rent bildspel

-Kaninplasma helst, mänsklig eller hästplasma kan också användas. Plasma kan förvärvas kommersiellt lyofiliserad och rekonstituerad när den kommer att användas eller kan användas färskt (nyligen tas). Ett annat livskraftigt alternativ är användningen av fibrinogen.

-Saltlösning (0,85%) steril (SSF).

Få färsk plasma

Extrahera människo- eller djurens venösa blod. Något av följande antikoagulantia kan användas: EDTA, kalciumoxalat, heparin eller natriumcitrat. Blanda väl och centrifugera. Aseptiskt ta bort supernatanten (plasma), utan röda blodkroppar och avsätta i ett sterilt rör.

Plasmaseparation. Källa: Foto taget av författaren: MSC. Marielsa Gil.

Lyofiliserad plasma

Rekonstitut som anges av Commercial Kit Injektet.

Färskt fibrinogen

Från en citrerad plasma, blanda plasma med en mättad lösning av natriumklorid. Låta.

Kassera supernatanten, rekonstituera fällningen upp till 5 gånger sin volym med sterilt destillerat vatten. Lägg till 5 heparinenheter för varje ml fibrinogen. Spara.

Metod

I en bild placeras en droppe saltlösning och en droppe plasma separat. Ta med platinahandtaget 1 eller 2 rena kolonier av mikroorganismen för att prova.

Blanda bakterielasten i plasmavloppet och upprepa operationen i SSF -droppen. Notera resultaten omedelbart. Ett positivt resultat kommer att vara det där bildningen av en makroskopisk agglutinerad (vit fällning) observeras efter en minut på droppsidan med plasma.

Det kan tjäna dig: Ekofysiologi: Vilka studier och tillämpningar i djur och grönsaker

SSF: s droppe fungerar som en negativ kontroll. Om agglutination med SSF observeras, betyder det att mikroorganismen är självaglutin, att kunna ge falska positiva resultat. I detta fall måste det bekräftas med rörtestet.

Det rekommenderas också att montera en positiv kontroll med en känd stam av S. aureus.   

Tolkning

Agglutination inom 5 till 20 seg (starkt positivt test).

Variabel agglutination mellan 20 sekunder och en minut (positivt försenat test).

En viss grad av agglutination efter en minut (tvivelaktigt test). Det rekommenderas att upprepa testet eller bekräfta med rörmetoden.

Det finns ingen agglutination (negativt test).

Resultat med SSF. Det måste alltid ge negativt om resultatet av testet automatiskt.

-Tube Coagulase Test

Materiel

-Sterilt provrör

-Plasma

-Maria -bad vid 37 ° C.

Metod

Mät med en steril 0,5 ml pipett av plasma och placera den i ett 12 x 75 provrör. Ladda platinahandtaget med 2 till 4 rena kolonier för att studera från en solid gröda från 18 till 24 timmar och skiljer sig in i plasma noggrant, blanda och inkubera vid 37 ° C i 4 timmar.

Undersök röret vid den första timmen utan att skaka det, bara lutat försiktigt. Om ingen koagel fortfarande observeras kan du fortsätta att observera var 30: e minut tills det är slutfört 4 timmar. Om det efter 4 timmar fortfarande är negativt kan det lämnas upp till 24 timmar men vid rumstemperatur. Observera och rapportera resultatet.

Baserat på upplevelsen rekommenderar vissa mikrobiologer att använda 500 | il av en bakteriell suspension från en 18 -timmars gröda i ett flytande medium för att utföra testet.

Uppenbarligen erbjuder det snabbare och mer tillförlitliga resultat än när kolonier från fasta medier emulgeras, särskilt om mänsklig plasma erhållits från blodbanken har använts.

Användningen av stammar från en buljong hjälper till att utspäda den möjliga närvaron av humana anti-stafylokock antikroppar i plasma som kan hämma verkan av koagulas.

Tolkning

Om en koagel som täcker all vätska (fullständig koagulation) eller koagel som ingenting i den återstående vätskan (partiell koagulering) bör betraktas som ett positivt test.

Kan tjäna dig: grenar av biologi och vad studerar de

Om det inte bildas, det vill säga, är suspensionen homogen, testet är negativt.

-Koagulastest med fibrinogen

Fibrinogen används precis som plasma och tjänar både för hållartest och rörtest. Fortsätt som beskrivs för plasma och tolka på samma sätt.

Använda sig av

Den är van vid att differentiera Staphylococcus aureus av negativt koagulas stafylokocker.

QA

Har färska grödor av en stam av S. aureus Att användas som positiv kontroll. Du kan också ha en stam av S. epidermidis Som negativ kontroll.

Begränsningar

-Ett positivt test bör inte lämnas i inkubation på 24 timmar, som S. aureus producerar fibrinolisin som löser upp koagelen.

-För tillförlitligt test bör färskt eller nyrekonstituerat plasma användas, liksom det är viktigt att använda färska bakteriekor (18 till 24 timmar). Detta undviker falska negativa.

-Testet måste utföras tillsammans med en negativ kontroll och ett positivt.

-Vissa solida medier kan störa koagulastestet. Det rekommenderas inte.

-Om citrerad plasma används, rekommenderas det att placera 5 heparinenheter per ml plasma för att undvika falska positiva. Detta beror på att några olika mikroorganismer från S. aureus De kan sönderdelas citrat och göra plasmaklot. I det här fallet är det tillrådligt att göra gram och ett katalastest.

-Det är viktigt att i rörtestet övervaka reaktionen var 30: e minut, eftersom det finns stammar av S. aureus som ger höga koncentrationer av fibrinolisin och kommer att späda ut den nybildade koagelen. Undvik falska negativa.

-Vid övervakning av testet måste röret undvikas plötsligt, detta kan förstöra början på bildningen av den koagel som inte kommer att återställas, vilket orsakar falska negativa.

Referenser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnos. 5: e upplagan. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnos. 12 ed. Pan -amerikanska redaktionella.TILL. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiska tester för identifiering av klinisk betydelse bakterier. 3: e upplagan. Pan -amerikansk redaktion. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-lablaboratorier. Kanin. Finns på: pro-lab.com
5. "Koagulas." Wikipedia, fri encyklopedi. Feb 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.org.