Neubauer kamerahistoria, egenskaper, användningar

De Neubauer -kamera, Värmeimeter eller Hechocytometer, är ett laboratorieinstrument som består av en speciell glasplack. Denna kammare tjänar till att utföra vissa celltyper som röda blodkroppar, vita blodkroppar och blodplättar, även om den kan användas för att räkna sporer, spermier, parasiter, etc.

Den presenterar mycket speciella egenskaper, eftersom det består av 3 zoner, en central för räkningen och två stödzoner. Varje kamera har två räkningsområden eller retiklar, en längst upp och en längst ner.

Neubauer -kamera. Källa: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org/licenser/BY-SA/4.0)]. Redigerad bild.

Dessa har flera divisioner i rutnätform. Räkningsområdena är de medelstora lådorna som finns i de fyra hörnen av båda retiklarna, plus det centrala torget.

Kameramonteringen bör göras mycket noggrant, eftersom alla detaljer påverkar cellantalet. Det finns många misstag som kan göras, men om någon av dem inträffar måste kameran demonteras, rena och återsmontera. Bland de viktigaste felen kan följande nämnas:

Rebosar kameran eller gör en otillräcklig fyllning, låt kameran torka, försök att ta bort överflödigt vätska med gasväv, luta kameran genom att transportera den, fylla en smutsig eller våt kamera, inte blanda utspädningen eller provet väl, bland andra. Alla dessa fel kommer att resultera ett overkligt värde.

[TOC]

Historia

Neubauer's Camera är ett precisionsinstrument, och i tillverkningsprocessen går det genom strikt kvalitetskontroll. Det skapades för exakta partiklar eller former av MM³, såsom celler i olika vätskor. Dess känsliga grafik är snidad med diamantpennor.

Neubauer -kammarens egenskaper

Den kompletta kameran är storleken på en normal bild så att den kan placeras på mikroskopplattan.

Kameran består av tre centrala rektangulära ytor (A, B, C). I zonen "B" finns R eller Count Zone, även kallad retikulum. En på varje sida av kameran, åtskild av "D" -zonen.

Neubauer -kamerans grafiska schema. Källa: Praktisk hematologiguide. Bioanalysskola vid University of Carabobo, Venezuela.

Varje retikulum är ett polerat område som innehåller bidragsområdet graverat. Den består av en fyrkant med en yta på 9 mm² Och det är internt uppdelat i 9 bilder med 1 mm² yta. De fyra hörnen är uppdelade i 16 mindre rutnät (0.0625 mm² Yta).

Dessa rutnät bildas av en serie millimeterlinjer som korsar varandra, som utgör perfekt grafiska rutnät och avgränsas till de angivna åtgärderna. Dessa linjer har spelats in med diamantspets.

Förbättrad Neubauer reticulum. Källa: Praktisk hematologiguide för Bioanalysskolan vid University of Carabobo, Venezuela.

De fyra sidorna motsvarar räkningsområdet. På dessa sidor eller hörn är det där kontot för de flesta celler (röda blodkroppar och leukocyter) utförs, medan blodplättar räknas i det centrala området.

Kan tjäna dig: Malachite Green: Egenskaper, förberedelser, applikationer, toxicitet

Den centrala zonen har fler divisioner, den består av en 1 mm kvadrat² uppdelat i 25 målningar som har ett område på 0,04 mm² varje. Dessa är i sin tur uppdelade i 16 rutnät med en yta på 0,0025 mm².

Beskrivning av den förbättrade Neubauer reticulum. a) kvadrat av hörnen, b) centrala fyrkant, c) medium kvadrat på det centrala torget. Källa: Praktisk hematologiguide för Bioanalysskolan vid University of Carabobo, Venezuela.

Området "A" och "C" fungerar som ett stöd för att placera ett speciellt objektomslag som kallas hematimetrisk lamell eller hematimeteröverdrag.

Höjden mellan lamellen och räkningsytan är 0,1 mm. Ytmätningarna på räkningsrutorna, liksom höjden på kameran och utspädningen av provet, är nödvändiga data för att utföra de slutliga beräkningarna.

Ansökningar

Det används för cellantal. Speciellt är det till stor hjälp inom hematologiområdet, eftersom det gör att den 3 blodkroppsserien kan göras; det vill säga röda blodkroppar, vita blodkroppar och blodplättar.

Det kan emellertid användas i andra områden, till exempel för att räkna spermier, sporer, bakterier eller andra viktiga element beroende på typ av prov.

Hur används?

Provberedning

För att utföra cellantalet börjar det vanligtvis från en tidigare utspädning. Exempel: För att räkna vita blodkroppar framställs en utspädning på 1:20 med Turk Liquid. Utspädningen är väl blandad innan pipetten laddas och ställer in Neubauer -kameran.

Det finns tillfällen då en utspädning på 1:20 inte räcker för att räkna. Till exempel hos patienter som lider av vissa typer av kroniska leukemier. I dessa fall bör högre utspädningar göras som 1: 100.

Om kontot är mycket lågt, som i svåra leukopenier, kan mindre utspädningar göras för att koncentrera provet. Exempel: Du kan göra en utspädning 1:10.

De förändringar som görs påverkar beräkningarna.

Neubauer -kammarens montering

Neubauer's Chamber monteras genom att placera den hematimetriska lamellen i den centrala zonen. Båda måste vara mycket rena och torra. För att placera lamellen tas den av kanterna och droppar försiktigt på kameran.

Detta fylls genom att placera spetsen på en automatisk pipett eller Thoma -pipett i en vinkel på 35 ° på kanten av lastområdet. Vätskan släpps försiktigt och lastningszonen fylls av kapillaritet. Detta görs på båda sidor för att ladda de två retiklarna.

Inga retiklar ska inte överbelastas och vätska ska inte förnekas. Lasten måste vara exakt. Det är viktigt att fyllningen görs homogent, det vill säga det bör inte finnas några bubblor.

När kameran är inställd i vila i 2 minuter för att cellerna fälls ut i bakgrunden och dess visualisering och räkning är enklare.

Efter att vilotiden är monterad på ljuset från ljusmikroskopet för observation. Först fokuserar den med ett 10x mål och vid behov övergår den till 40x.

Kan tjäna dig: Gap Anion

För att förbättra din visualisering reduceras mikroskopljuset. För att göra detta sänks kondensorn och membranet stängs lite.

konto

För redogörelsen för de vita blodkropparna eller leukocyterna måste hela ytan på de fyra medelstora rutorna i hörnen och det centrala torget på varje retikulum räknas.

Räkningen börjar på kvadratet på det övre vänstra hörnet. Det börjar från den första kvadratet på den främre raden, det vill säga från vänster till höger för att nå motsatt ände.

Där sänks det och utseendet returneras från höger till vänster tills den når den andra änden och så på cellerna i varje rutnät i form av sicksack. De 16 rutnäten på varje medium kvadrat räknas.

För att undvika att räkna en cell två gånger finns det regler för cellerna som finns på de gränsande linjerna för varje rutnät. Cellerna som är belägna i vänster och övre linjer räknas och de som är belägna på höger och nedre linjer ignoreras.

En manuell cellräknare bör vara tillgänglig så att operatören förtrycker enhetsnyckeln så många gånger som observation av celler. Med användningen av revisoren kan operatören räkna utan att behöva titta upp från det mikroskopiska fältet. I slutet av kontot kommer du att observera det totala antalet celler som räknas.

Beräkningar

För beräkningar kan du fortsätta på flera sätt. Du kan räkna en enda retikulum eller båda kan räknas och i genomsnitt båda. I dessa två situationer måste de räknade cellerna multipliceras med en faktor, som i detta fall skulle vara 40. Och så erhålls det totala antalet per mm³.

Men om de två retiklarna räknas och det inte finns något genomsnitt, måste det multipliceras med en annan faktor, i detta fall med 20.

-Multiplikationsfaktor

Därefter beräknas multiplikationsfaktorn.

För beräkningarna beaktas flera data, inklusive utspädningens titel, kammarens höjd och ytan berättade.

Utspädning

Utspädningen som används på ett standard sätt är 1:20 för leukocytantalet.

Kammarhöjd

Höjden mellan kameran och den hematimetriska lamina är 0,1 mm.

Räknad yta

Om 5 rutor av 1 mm räknas² yta, det betyder att räknarens totala redogörelse är 5 mm². Dessa data måste multipliceras med kamerahöjden för att få den totala volymen som berättas. Det vill säga 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Formler och beräkningar

Med de uppgifter som sägs sägs det:

Om vid 0,5 mm³ -det räknas ° av celler

På 1 mm³ --det kommer att finnas - x antal celler

X cell n ° = (n ° av celler kalerade x 1) /0,5 mm³

Men utspädning måste också beaktas. Därför är formeln som följer:

(N ° av räknade celler x 1) x 20/0,5 mm³

Slutligen, för att sammanfatta kan du multiplicera antalet celler som räknas med 40. Således erhålls värdet på leukocyter per mm³.

Kan tjäna dig: osmos: process, typer, skillnader med diffusion och exempel

Om de två retiklarna räknas ändras datadata som i detta fall skulle vara 10 rutor, det vill säga 10 mm². Och en total volym berättad om 1 mm3. Formeln skulle kvarstå:

(N ° av celler räknade x 1) x 20/1 mm³

Därför skulle multiplikationsfaktorn i detta fall vara 20.

Misstag

-Om den när den laddas av kameran överskrids eller överskrids med vätska, kommer kamerans höjd att variera. Detta resulterar i räkningen av det verkliga. Om du försöker ta bort överskott med gasväv eller bomull representerar detta ett carafalfel. Denna åtgärd kommer att få cellerna att koncentrera sig, vilket ökar räkningen.

-Om det debiteras dåligt kommer räkningen under det verkliga.

-I händelse av att kameran är monterad och släpper ut är det inte längre möjligt att räkna eftersom den kommer att sända felaktiga resultat.

-Om utspädningen av provet inte är en risk för läsfel innan cellerna inte kommer att distribueras homogent att utspädas av provet. Därför kommer det att finnas mindre eller större koncentration av celler, beroende på om provet tas från vätskans yta respektive botten av röret.  

-Närvaron av bubblor minskar mängden vätska som måste komma in i retikeln och störa korrekt visualisering och distribution av celler. Allt detta påverkar resultaten väsentligt.

-Under räkningen, lyft inte mikroskopet förrän varje stor fyrkant är klar för att undvika att gå vilse.

-En anledning till fel är att böja kameran efter monterad. Därför bör du försiktigt ladda upp mikroskopplattan.

Rekommendation

Om du av någon anledning upptäcker en abnormitet vid inlämningen av kameran, rekommenderas det mest att du demonterar den beredningen, rengör kameran och återmonterar från grunden.

Var mycket försiktig när du rengör kameran för att undvika repetitionerna i retiklarna. Å andra sidan, kom ihåg att den hematimetriska lamelen är känslig och bräcklig. Otillräcklig manipulation kan bryta den.

Innan du börjar räkna, se till att cellerna har distribuerats väl. En ojämn fördelning av celler sker genom en dålig blandning av provet eller utspädning. Om detta händer måste församlingen upprepas.

Ett sätt att veta om cellerna är väl distribuerade jämför kontot för varje stort kvadrat, antalet celler som räknas av varje kvadrat inte bör överdrivas olika mellan det ena och den andra.

-Om den vita blodkroppen räknas över 50.000 mm³ Det är tillrådligt att upprepa kontot, vilket gör en större utspädning.

-Om den modifierar utspädningen måste multiplikationsfaktorn beräkna igen, eftersom detta påverkar formeln.

Referenser

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Jämförelse av spermkoncentration med Maklers kamera och Neubauer's Camera. UROL ESP 2008; 32 (4): 443-445. Finns på: Scielo.
2. Neubauer -kamera. (2018, 27 mars). Wikipedia, fri encyklopedi. Datum för samråd: 04:10, 23 juni 2019 från ES.Wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Tillämpning av en alternativ räkningsmetod i Neubauer's Chamber för att bestämma koncentrationen av Vaginalis Trichomonas. Varv. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Finns på: ResearchGate.netto
4. Gómez-pérez roald e. Expermogramanalys. Varv. Venez. Endokrinol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Finns på: VE.Scielo
5. Praktisk hematologiguide för bioanalysskolan vid University of Carabobo. Venezuela.1998